《农业微生物学》课程授课教案（实验讲义）实验五

农业微生物学实验五操作流程 【实验内容】 1、配制牛肉青蛋白胨琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基和高氏一号琼脂培养基 2、制作无菌水 3、制作无菌吸管 4、学习实验室常用的几种灭菌方法 【实验前的准备及核对】 1、请将自带的一切物品如书包、文具、衣物、水杯等放到柜子内或边台上。 2、核对实验材料： (1)吸管、棉花、牙签、报纸 (2)牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCI 马铃薯、蔗糖、琼脂、纱布 可溶性淀粉、K2HPO4、MgsO4、FeSO4、NaCI、KNO3、琼脂 (3)漏斗、玻棒、铁丝筐、电磁炉、牛皮纸、线绳、量筒、搪瓷杯、天平、称量纸、称量勺 (2)300ml三角瓶(2个12人) (3)试管(5支/2人) (4)记号笔(1支2人) 【1、配制培养基】 1.1根据指导教师的要求选定培养基，根据培养基的瓶数（150ml瓶)，计算出总量，按照培养基的 配方，计算出各种成分的量 1.2称取琼脂：称取2.8-3.0克琼脂于每个300ml三角瓶中。 1.2称量：准确称取其余各成分于塘瓷杯中。 13配制：各种培养基的配制参看实验指导。 1.4调pH:根据培养基的配方用1NHC1或1 N NaOH调节至要求的pH

1 【实验内容】 1、配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯琼脂培养基和高氏一号琼脂培养基 2、制作无菌水 3、制作无菌吸管 4、学习实验室常用的几种灭菌方法 【实验前的准备及核对】 1、请将自带的一切物品如书包、文具、衣物、水杯等放到柜子内或边台上。 2、核对实验材料： （1）吸管、棉花、牙签、报纸 （2）牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl 马铃薯、蔗糖、琼脂、纱布 可溶性淀粉、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、NaCl、KNO3、琼脂 （3）漏斗、玻棒、铁丝筐、电磁炉、牛皮纸、线绳、量筒、搪瓷杯、天平、称量纸、称量勺 （2）300ml 三角瓶（2 个/ 2 人） （3）试管（5 支/ 2 人） （4）记号笔（1 支/2 人） 【1、配制培养基】 1.1 根据指导教师的要求选定培养基，根据培养基的瓶数（150ml/瓶），计算出总量，按照培养基的 配方，计算出各种成分的量。 1.2 称取琼脂：称取 2.8-3.0 克琼脂于每个 300ml 三角瓶中。 1.2 称量： 准确称取其余各成分于搪瓷杯中。 1.3 配制：各种培养基的配制参看实验指导。 1.4 调 pH：根据培养基的配方用 1N HCl 或 1N NaOH 调节至要求的 pH。 农业微生物学实验五操作流程

1.5定容：加蒸馏水定容至培养基的总量。 1.6分装：量取150ml培养基，分装于已称好琼脂的三角瓶中。 1.7分装后的三角瓶用封口膜包好，在封口膜的上方再包一层牛皮纸，用绳系好 1.8用记号笔注明培养基的名称、配制日期。 1.9灭菌。 【2、制作无菌水】 2.1每2人制作1瓶无菌水：将90ml蒸馏水分装于300ml三角瓶中，再装入20-30粒玻璃珠，瓶 口加封口膜及牛皮纸并包扎，灭菌。 2.2每2人制作5支无菌水管：分装4.5ml蒸馏水于试管中，塞上瓶塞，10支试管捆成一捆，用牛 皮纸包好，灭菌。 【3、制作无菌吸管】 3参照实验指导包装吸管。 【4、灭菌】 4.1对培养基和无菌水进行高压蒸汽灭菌：参照实验指导。 4.2参观干热灭菌装置。 4.3参观无菌操作台。 【实验结束后的整理】 1、严格按要求配制培养基、制作无菌水。经指导老师检查后，再放入灭菌锅中灭菌。 2、收拾自己实验台，将使用过的各样物品归位，保持实验前的原样。 3、指导老师同意后方可离开。 4、值日生清扫地面，擦拭桌面。 5、课后预习下一次实验，下次上实验时交上实验报告

2 1.5 定容：加蒸馏水定容至培养基的总量。 1.6 分装：量取 150ml 培养基，分装于已称好琼脂的三角瓶中。 1.7 分装后的三角瓶用封口膜包好，在封口膜的上方再包一层牛皮纸，用绳系好。 1.8 用记号笔注明培养基的名称、配制日期。 1.9 灭菌。 【2、制作无菌水】 2.1 每 2 人制作 1 瓶无菌水：将 90ml 蒸馏水分装于 300ml三角瓶中，再装入 20~30 粒玻璃珠，瓶 口加封口膜及牛皮纸并包扎，灭菌。 2.2 每 2 人制作 5 支无菌水管：分装 4.5ml 蒸馏水于试管中，塞上瓶塞，10 支试管捆成一捆，用牛 皮纸包好，灭菌。 【3、制作无菌吸管】 3.参照实验指导包装吸管。 【4、灭菌】 4.1 对培养基和无菌水进行高压蒸汽灭菌：参照实验指导。 4.2 参观干热灭菌装置。 4.3 参观无菌操作台。 【实验结束后的整理】 1、严格按要求配制培养基、制作无菌水。经指导老师检查后，再放入灭菌锅中灭菌。 2、收拾自己实验台，将使用过的各样物品归位，保持实验前的原样。 3、指导老师同意后方可离开。 4、值日生清扫地面，擦拭桌面。 5、课后预习下一次实验，下次上实验时交上实验报告