安徽医科大学基础医学院：免疫组织化学染色技术（讲稿）

免疫组织化学染色技术 综合实验室李报 2014.4.2

免疫组织化学染色技术 综合实验室 李报 2014.4.2

提纲 一原理 二组织材料的制备 三免疫组织化学检测方法 四染色过程 五结果判断 六染色失败的几种原因

提纲 一原 理 二 组织材料的制备 三 免疫组织化学检测方法 四 染色过程 五 结果判断 六 染色失败的几种原因

一原理 通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性 抗体（单克隆或多克隆）检测组织、细胞内相 应的抗原物质，形成抗原一抗体复合物；此 复合物上带有事先标记的标记物，通过与标记 物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使 之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗 原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的

通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性 抗体（单克隆或多克隆）检测组织、细胞内相 应的抗原物质，形成抗原 — 抗体复合物；此 复合物上带有事先标记的标记物，通过与标记 物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使 之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗 原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的 。 一 原 理

P物质 抗P物质抗体 标记抗体 十 标记物

P物质 抗P物质抗体 标记物 标记抗体

二组织材料的制备 一取材 二固定 三脱水 四包埋 五切片 六染色

二 组织材料的制备 一取材 二固定 四包埋 六染色 三脱水 五切片

组织材料的固定 (1)防止组织细胞的死后变化，防止自溶和 腐败，以保持组织细胞的固有形态。 (2)有效的保护抗原，防止降解丢失。 (3)固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、 增加组织硬度、便于制片。（广口瓶）

（1）防止组织细胞的死后变化，防止自溶和 腐败，以保持组织细胞的固有形态。 （2）有效的保护抗原，防止降解丢失。 （3）固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、 增加组织硬度、便于制片。（广口瓶） 组织材料的固定

固定液的选择： (1)甲醛固定液：10%福尔马林 (2)4%多聚甲醛固定液（难溶） (3)丙酮及醇类固定剂

固定液的选择： (1)甲醛固定液：10％福尔马林 (2)4%多聚甲醛固定液（难溶） (3)丙酮及醇类固定剂

固定时间： 固定时间要视组织块的厚薄，固定液的种 类及浓度，温度而定，原则上，组织块 大小与固定时间成正比，固定液的穿透 力及浓度与固定时间成反比

固定时间： 固定时间要视组织块的厚薄，固定液的种 类及浓度，温度而定，原则上，组织块 大小与固定时间成正比，固定液的穿透 力及浓度与固定时间成反比

固定时注意事项： 新鲜，动物死后 组织块不宜过大 固定剂的量要超 半小时内固定， 过厚，2cm×宽 过组织的20倍体 最迟不得超过2 1.5cm×厚0.3cm 积。 小时

固定时注意事项： 1 新鲜，动物死后 半小时内固定， 最迟不得超过2 小时。 3 固定剂的量要超 过组织的20倍体 积 。 2 组织块不宜过大 过厚，2㎝×宽 1.5㎝×厚0.3 ㎝

组织脱水（脱水机）和石蜡包埋 75%乙醇、85%乙醇、95%醇I、无 水乙醇I、I和Ⅲ，二甲苯I、Ⅱ 和Ⅲ，石蜡I、Ⅱ和Ⅲ

75％乙醇、85％乙醇、95％醇Ⅰ、无 水乙醇Ⅰ 、Ⅱ和Ⅲ ，二甲苯Ⅰ、Ⅱ 和Ⅲ，石蜡Ⅰ 、Ⅱ和Ⅲ 。 组织脱水(脱水机)和石蜡包埋