《分析化学》课程教学资源（习题解答）第18章 高效液相色谱法

例18-1试讨论采用反相HPLC法时分离条件的选择。 答：分离条件包括固定相、流动相、其他添加剂及柱温等。反相 HPLC法常用非极性固定相，如ODS柱，也可根据被分离物的极性 选用中等极性甚至极性固定相：反相HPLC法常以极性溶剂为流动 相，如甲醇-水、乙腈-水等，通过改变溶剂的种类和比例来调整流动 相的选择性和洗脱能力：如果被分离物是弱酸或弱碱，可以在流动相 中加入酸或碱抑制其解离；如果被分离物是离子型化和物，一般需加 入缓冲盐并调节pH,有时还需加入离子对试剂改变被分离物在色谱 柱上的保留行为：另外，还可调节柱温改善分离或调整保留时间。 例18-2在HPLC法常用的溶剂中，水的洗脱能力如何？计算反 相色谱中甲醇-乙睛-水(70：1020)的强度因子。如果想使组分的保 留时间缩短，应怎样调整溶剂的比例？如果用四氢呋喃代替乙腈，为 了保持相同的洗脱强度，但水的含量不变，则甲醇的比例变为多少？ 答：在正相洗脱时，水的洗脱能力最强（极性参数P最大，为 10.2),而在反相洗脱时，水的洗脱能力最弱（强度因子S最小，为0）： S=S甲0m+Sz0z+S*0本=3.0×0.70+3.2×0.10+0×0.20=2.42 如果想使组分的保留时间缩短，也就是增大流动相的洗脱能力， 可以增大甲醇和乙腈的比例，或者减少水的比例；用四氢呋喃代替乙 腈后，甲醇的比例为x,则3.0×x+4.5×(0.8一x)+0×0.20=2.42 X=0.787=78.7% 例18-3内标对比法测定对乙酰氨基酚原料药的含量，以非那西 汀作为内标物：精密称取对乙酰氨基酚对照品及非那西汀对照品适

例 18-1 试讨论采用反相 HPLC 法时分离条件的选择。 答：分离条件包括固定相、流动相、其他添加剂及柱温等。反相 HPLC 法常用非极性固定相，如 ODS 柱，也可根据被分离物的极性 选用中等极性甚至极性固定相；反相 HPLC 法常以极性溶剂为流动 相，如甲醇-水、乙腈-水等，通过改变溶剂的种类和比例来调整流动 相的选择性和洗脱能力；如果被分离物是弱酸或弱碱，可以在流动相 中加入酸或碱抑制其解离；如果被分离物是离子型化和物，一般需加 入缓冲盐并调节 pH，有时还需加入离子对试剂改变被分离物在色谱 柱上的保留行为；另外，还可调节柱温改善分离或调整保留时间。 例 18-2 在 HPLC 法常用的溶剂中，水的洗脱能力如何？计算反 相色谱中甲醇-乙腈-水（70:10:20）的强度因子。如果想使组分的保 留时间缩短，应怎样调整溶剂的比例？如果用四氢呋喃代替乙腈，为 了保持相同的洗脱强度，但水的含量不变，则甲醇的比例变为多少？ 答：在正相洗脱时，水的洗脱能力最强（极性参数 P'最大，为 10.2），而在反相洗脱时，水的洗脱能力最弱（强度因子 S 最小，为 0）； S 混=S 甲 φ 甲+S 乙 φ 乙+S 水 φ 水=3.0×0.70+3.2×0.10+0×0.20=2.42 如果想使组分的保留时间缩短，也就是增大流动相的洗脱能力， 可以增大甲醇和乙腈的比例，或者减少水的比例；用四氢呋喃代替乙 腈后，甲醇的比例为 x，则 3.0×x+4.5×(0.8－x)+0×0.20=2.42 x=0.787=78.7% 例 18-3 内标对比法测定对乙酰氨基酚原料药的含量，以非那西 汀作为内标物：精密称取对乙酰氨基酚对照品及非那西汀对照品适

量，配制成含非那西汀10.21μgml、含对乙酰氨基酚9.25μgml的对 照品溶液。另精密称取对乙酰氨基酚原料药50.5mg,置100ml容量 瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀得供试品贮备液；精密量取供试 品贮备液1ml及非那西汀对照品贮备液适量，于50ml容量瓶中，配 制成含非那西汀1021gml的样品溶液。平行测定对照品溶液和样品 溶液各3次，蜂面积取平均值。对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积 为2058574，非那西汀的峰面积为1941261；样品溶液中对乙酰氨基 酚的峰面积为2493831，非那西汀的峰面积为2487683。 ×4am/Am=9.25×2058574194126 2493831/2487683 =9.78g1ml 对乙酰氨基酚%=978×50X10×10×100%=96.8% 50.5 例184欲测定二甲苯的混合试样中的对二甲苯的含量。称取该 试样110.0mg,加入对-二甲苯的对照品30.0mg,用反相色谱法测定。 加入对照品前后的色谱峰面积(mm2)值为，对-二甲苯：A对=40.0， A对=104.2；间-二甲苯：A=141.8,A=1562。试计算对-二甲苯的 百分含量。 An Am 解：m,1安- 40.0/1418 -0042n102408182e） w%=器品x10=201

量，配制成含非那西汀 10.21μg/ml、含对乙酰氨基酚 9.25μg/ml 的对 照品溶液。另精密称取对乙酰氨基酚原料药 50.5mg，置 100ml 容量 瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀得供试品贮备液；精密量取供试 品贮备液 1ml 及非那西汀对照品贮备液适量，于 50ml 容量瓶中，配 制成含非那西汀 10.21μg/ml 的样品溶液。平行测定对照品溶液和样品 溶液各 3 次，峰面积取平均值。对照品溶液中对乙酰氨基酚的峰面积 为 2058574，非那西汀的峰面积为 1941261；样品溶液中对乙酰氨基 酚的峰面积为 2493831，非那西汀的峰面积为 2487683。 解： 例 18-4 欲测定二甲苯的混合试样中的对-二甲苯的含量。称取该 试样 110.0mg，加入对-二甲苯的对照品 30.0mg，用反相色谱法测定。 加入对照品前后的色谱峰面积（mm2）值为，对-二甲苯：A 对=40.0， A 对'=104.2；间-二甲苯：A 间=141.8，A 间'=156.2。试计算对-二甲苯的 百分含量。 解：