《药理学》课程实验指导（讲义）实验5 全血水杨酸钠二室模型药动学参数测定

实验5全血水杨酸钠二室模型药动学参数测定 数。旧们用比色法测定水局酸的浓度。并用测得的盒有流度数据计复二空餐型特动学参 (CASIOfx-180P或CASIO-3600P)。 液(5g三氯化铁加10% [恸物家兔 仿法 一、比色法测定全血水杨酸钠浓度 1.取10m1大试管11支，以0-10编号，每管均加入三氯化铁和三氯酯酸混合试液 静脉并在其下方横穿一根细线，供采血时固定静脉用。 2.以100u/m1肝素生理盐水润湿1m1注射器，从该侧颈外静脉采血0.6m1加入0号 大试管中，用干棉球轻压针孔处以防止出血。从已分离出的颈外静脉的对侧耳缘静脉推注 洗净注射器，以肝素生理盐水润湿备用) 3.振摇0-8管各1分钟，分别加入蒸墙水5m1再充分振据1分钟，过滤至小试管中取 滤液备用。9、10两管加蒸馏水5m1,摇匀待用。 0nm,lm光径比色 容衣破的光金议写场破度下别然宽水学.测0：0号管光 标准管水杨酸钠光密度D-dg-d1o 测定管水杨酸钠光密度D=dn-d, 测定管水杨酸钠浓度C=D./D×400(g/ml) 注意事项] 1采血量要准确。 2.以开始采血时间作为血样本时间，若未能按时采血，则以实际采血时间参加计算。 3.注射水杨酸钠溶液时，动物会挣扎，注意固定兔头，注射要一次成功，否则影响

实验 5 全血水杨酸钠二室模型药动学参数测定 [目的] 用比色法测定水杨酸钠浓度，并用测得的血药浓度数据计算二室模型药动学参 数。 [器材] 大试管（10ml×11）、小试管（6ml×9）、刻度吸管（10ml×2、2ml、5ml×1）、 注射器（1ml×2、2ml、5ml×1）、小玻棒、试管架、玻璃蜡笔、移液吸管、普通剪刀与手术 刀（各 1）、弯曲管钳、坐标纸、线与棉花少许。粗天平、分光光度计、离心机、计算器 （CASIOfx-180P 或 CASIO-3600P）。 [药品] 1％盐酸普鲁卡因溶液、10％及 0.04％水杨酸钠溶液、三氯化铁和三氯醋酸混合 液（5g 三氯化铁加 10％三氯醋酸溶解至 100ml）、100u/ml 肝素生理盐水。 [动物] 家兔 [方法] 一、比色法测定全血水杨酸钠浓度 1. 取 10m1 大试管 11 支，以 0－10 编号，每管均加入三氯化铁和三氯醋酸混合试液 2m1，9 号管再加 0.04％水杨酸钠标准液 0.6m1，10 号管再加蒸馏水 0.6m1。取兔 1 只，称 体重，仰缚兔板上，于兔颈部皮下注射 1％盐酸普鲁卡因溶液 1-2m1，局麻后分离一侧颈外 静脉并在其下方横穿一根细线，供采血时固定静脉用。 2. 以 100u／m1 肝素生理盐水润湿 1m1 注射器，从该侧颈外静脉采血 0.6m1 加入 0 号 大试管中，用干棉球轻压针孔处以防止出血。从已分离出的颈外静脉的对侧耳缘静脉推注 10％水杨酸钠溶液 2ml/kg。准确记录给药完毕时间，在给药完毕后的第 1、3、5、10、20、 50、80 和 110 分钟从颈外静脉分别采血 0.6m1，依次加入第 1-8 号大试管中（每次采血后要 洗净注射器，以肝素生理盐水润湿备用）。 3. 振摇 0-8 管各 1 分钟，分别加入蒸馏水 5m1 再充分振摇 1 分钟，过滤至小试管中取 滤液备用。9、10 两管加蒸馏水 5m1，摇匀待用。 4. 在分光光度计上，用波长 510nm，1cm 光径比色杯，以蒸馏水调零，测 0-10 号管光 密度得 d0-d10。各测试管水杨酸钠光密度与水杨酸钠浓度按下列公式计算： 标准管水杨酸钠光密度 D9=d9-d10 测定管水杨酸钠光密度 Dn=dn-do 测定管水杨酸钠浓度 Cn=Dn／D9×400（μg／m1) [注意事项] 1. 采血量要准确． 2. 以开始采血时间作为血样本时间，若未能按时采血，则以实际采血时间参加计算。 3. 注射水杨酸钠溶液时，动物会挣扎，注意固定兔头，注射要一次成功，否则影响 α-

相结果。 二、二室模型药动力学参数计算 1,残差图解法 成有将得的血中杨酸销达我对数.以对数迷度纵坐标，对应时回为描坐标作点国 上作 ,可见 相)，血药浓度下降与时间不呈直线关系：后段下降缓慢（消除相或称B-相），且呈直线， 符合二室模型，可用两项指数方程表示血药浓度和时间的关系： C-Ae-w+Be Xo(a-Ka) A='c(@-) X(21- B='c(@- 6) 速幸分别示 筒除的设于废象 C-Be- (4) (④)式取对数 (5 在回归线上任取一点M(:,gC)的值代入下式 2.30260ogB-1ogC) t (分) T2s由下式算出 T2B=0.693/B(分) () Cr=Ae-

相结果。 二、二室模型药动力学参数计算 1. 残差图解法 将测得的血中水杨酸钠浓度取对数，以对数浓度为纵坐标，对应时间为横坐标作点图， 或直接以浓度对时间在半对数纸上作图，可见首段对数血药浓度下降很快（分布相，或称 α- 相），血药浓度下降与时间不呈直线关系；后段下降缓慢（消除相或称 β-相），且呈直线， 符合二室模型，可用两项指数方程表示血药浓度和时间的关系： C= (1) A= (2) B= (3) t 为时间，A、B 分别表示 t=0 时 α 相和 β 相的起始血药浓度。α、β 为主要反映分布与 消除的复合速率常数，e 为自然对数的底数，因 α>β，Ae-αt 值趋于 0 比 Be-βt 值趋于 0 更快， 当 t≥5Tl/2α 时，则 Ae-αt 趋于 0，则（1）式为 C= (4) (4)式取对数 logC= (5) (5)式表明消除相的对数血药浓度与时间呈直线关系，直线斜率 b=β/2.3026，故可求出 β。 对本次实验的 4 点作目测回归线，外推与纵轴相交交点则为 t=0 时的截距 logB。 在回归线上任取一点 M（t，!ogC）的值代入下式 β= （分-1） (6) T1/2β 由下式算出 T1/2β＝0.693/β（分） (7) 解得方程(1)的后项 Be-βt 后，以实测的前 4 点血浓度减去消除相外推线上相对应时间的浓 度（注意：是真数相减）得一组残差浓度 Cr，即： Cr= (8)

(8)式取对数 (9) 作这业摩 安关系。以残差浓度的对数和 2.3026(log A-log Cr) (分1) (10) 0.693 Tnt-&(分) (11) X。 Ve-A+B (ml) (12) (12)试可变为A+B=XaNc代入(3)式，可算出药物由周边室向中央室转运的速率常数 AB+Ba K1=A+B(分) (13) 经中央室消除的速率常数为 aB KI0=K1（分1) (4) 由中央室向周边室转运的速奉常数 K=a+B-K1-K0(分 药时曲线下的面积0-) 4+B AC-a(g分miD 16 总的表观分布容积 Vd=Xo/B-AUC (ml) (17

(8)式取对数 LogCr= t (9) (9)式表明残差浓度的对数与时间 t 为直线关系。以残差浓度的对数和对应的时间作图， 作这些点的目测回归线，外推，与纵轴的交点分布相 t=0 时截距 LogA。在此直线上任取一 点 N（t，LogCr），其对应值代入下式求出 α： α= （分-1） (10) T1/2αt= （分） (11) 当 t=0 时，(1)式 C=A+B，药物既未分布也未消除，静注药量(X0)全部在中央室，故中 央室的分布容积下式求出： Vc= （ml） (12) (12)式可变为 A+B=X0/Vc 代入(3)式，可算出药物由周边室向中央室转运的速率常数 K21： K21= （分-1） (13) 经中央室消除的速率常数为 K10= （分-1） (14) 由中央室向周边室转运的速率常数 K12= （分-1） (15) 药时曲线下的面积(t=0~∞) AUC= （μg·分/ml） (16) 总的表观分布容积 Vd=X0/β·AUC（ml） (17)

总清除率 TBCL=bVd(mV分) (18) 中央室药物清除率 cL=KioVc KioVe (mV分) (19) 将A、B、α、B代入(I)式得水杨酸钠浓度随时间变化的方程 2.残差计算法 图解法是以目测线为基础，其误差较大，回归分析法误差小，结果较可靠，在计算药 动学参数中应用较广。公式（⑤）表明曲线后段对数血药浓度与时间呈直线关系，但实测的对 数血药浓度不一定都在直线上。如能找到一条直线，使实测的对数血药浓度至该直线的距 离的平方和最小，那么这条直线的方程就表达了对数浓度随时间的变化关系。根据最小二 乘法原理，用实验数据求出直线的回归系数B和截距A,则直线方程y=A+Bx就唯一被确 定 n∑W-∑X∑Y B= ∑X2-(∑)2 ∑Y-B∑X A= ∑W-∑x∑Y 。∑-Z为2"Zr2-∑)2 式中n为标本个数，X表示时间t,Y表示药物浓度的对数logC。r为相关系数，其绝 对值的大小与各点至回归线的距离有关。各点离回归线愈近，则相关系数的绝对值趋近于1， 当一0说明两变量间无直线关系存在。 采用CASIO.FX-180p或CASIOfx-3600P,不仅能解出回归方程的系数B、截距A和相 关系数，而且求解指数方程系数也很方便。 [思考题]测定药动学参数对临床使用药物有何指导意义？

总清除率 TBCL=β·Vd （ml/分） (18) 中央室药物清除率 CL= KioVc (ml/分） (19) 将 A、B、α、β 代入(1)式得水杨酸钠浓度随时间变化的方程 2. 残差计算法 图解法是以目测线为基础，其误差较大，回归分析法误差小，结果较可靠，在计算药 动学参数中应用较广。公式(5)表明曲线后段对数血药浓度与时间呈直线关系，但实测的对 数血药浓度不一定都在直线上。如能找到一条直线，使实测的对数血药浓度至该直线的距 离的平方和最小，那么这条直线的方程就表达了对数浓度随时间的变化关系。根据最小二 乘法原理，用实验数据求出直线的回归系数 B 和截距 A，则直线方程 y=A+Bx 就唯一被确 定． B= A= r= 式中 n 为标本个数，X 表示时间 t，Y 表示药物浓度的对数 logC。r 为相关系数，其绝 对值的大小与各点至回归线的距离有关。各点离回归线愈近，则相关系数的绝对值趋近于 1， 当 r=0 说明两变量间无直线关系存在。 采用 CASIO.FX-180p 或 CASIOfx-3600P，不仅能解出回归方程的系数 B、截距 A 和相 关系数 r，而且求解指数方程系数也很方便。 [思考题]测定药动学参数对临床使用药物有何指导意义？