《临床检验仪器学》课程教学资源（讲义）实验06 血细胞分析仪的校准

实验6血细胞分析仪的校准 实验目的 1.熟悉血细胞分析仪的操作。 2.熟悉仪器重复性和携带污染率测定。 3.掌握血细胞分析仪的校准方法。 实验器材 血细胞分析仪，配套稀释液、溶血素、清洗液，配套校准物或具有量值可溯源 性已定值的新鲜全血，计算器，EDTA-Ka真空采血管及其他采血用品，一次性不起毛 纸巾等。 实验原理 在血细胞分析仪检测的稳定性、精密度良好的前提下，使用有溯源性的配套校 准品或定值新鲜全血校准品，通过对红细胞等主要参数进行测试，对血细胞分析仪 进行测试和调整，纠正仪器的系统误差，保证血细胞分析仪结果的准确性及可比性 血细胞分析仪在以下情况需进行校准：刚安装的仪器使用前：关键部件进行维 修后，可能对检测结果的准确性有影响时：室内质量控制显示检测结果有漂移，但 排除了仪器故障和试剂的影响因素时：长时间停用再开始启用时：对于开展常规检 验的实验室，仪器在长期使用过程中其检测结果可出现较大的偏差，要求至少半年 进行一次校准。 仪器描述 各类型血细胞分析仪基本都可由机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红 蛋白测定系统、计算机和键盘控制系统等构成。其主要结构见图16-1。 图16-1血细胞分析仪结构框图 实验步骤 1.仪器准备先用清洗剂对仪器内部各通道及检测池认真清理30mi,确认仪器 开机后以下几个指标在说明书规定的范围内。 (1)仪器本底计数：按要求进行空白计数且符合要求。 (2)仪器重复性测定：任取一份正常人新鲜全血（非校准物）在待校准仪器上连

实验 6 血细胞分析仪的校准 实验目的 1. 熟悉血细胞分析仪的操作。 2. 熟悉仪器重复性和携带污染率测定。 3. 掌握血细胞分析仪的校准方法。 实验器材 血细胞分析仪，配套稀释液、溶血素、清洗液，配套校准物或具有量值可溯源 性已定值的新鲜全血，计算器， EDTA-K2真空采血管及其他采血用品，一次性不起毛 纸巾等。 实验原理 在血细胞分析仪检测的稳定性、精密度良好的前提下，使用有溯源性的配套校 准品或定值新鲜全血校准品，通过对红细胞等主要参数进行测试，对血细胞分析仪 进行测试和调整，纠正仪器的系统误差，保证血细胞分析仪结果的准确性及可比性。 血细胞分析仪在以下情况需进行校准：刚安装的仪器使用前；关键部件进行维 修后，可能对检测结果的准确性有影响时；室内质量控制显示检测结果有漂移，但 排除了仪器故障和试剂的影响因素时；长时间停用再开始启用时；对于开展常规检 验的实验室，仪器在长期使用过程中其检测结果可出现较大的偏差，要求至少半年 进行一次校准。 仪器描述 各类型血细胞分析仪基本都可由机械系统、电学系统、血细胞检测系统、血红 蛋白测定系统、计算机和键盘控制系统等构成。其主要结构见图 16-1。 实验步骤 1.仪器准备 先用清洗剂对仪器内部各通道及检测池认真清理 30min，确认仪器 开机后以下几个指标在说明书规定的范围内。 （1）仪器本底计数：按要求进行空白计数且符合要求。 （2）仪器重复性测定：任取一份正常人新鲜全血(非校准物)在待校准仪器上连 图 16-1 血细胞分析仪结构框图

续测定11次，分别计算第2~11次红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(b)、红 细胞压积(Hct)、血小板(PLT)等10次结果的变异系数(CV)。 (3)携带污染率测定：任取一份正常人较高值（接近正常参考值上限）新鲜全 血（非校准物）在待校准仪器上连续测定3次，得高值H、出、H:将该份样本用稀释 液稀释4倍混匀得低值血标本，再在待校准仪器上连续测定3次，得低值L、L2、L, 按下式计算： 污染率=(L-Ls)/(H-La)×100% 2.校准物准备 (1)使用制造商提供的配套校准物：①将校准物在室温(18℃一25℃)下放置 15~30mi:②观察校准物是否超出有效期，是否有变质或污染；③轻轻地将校准物 反复颠倒混匀，并置于两手间慢慢搓动，使其充分混匀：④将两瓶校准物合在一起， 混匀后再分装于2个瓶内（打开瓶塞时，应垫上纱布或软纸，使溅出的血液被吸收）。 (2)使用新鲜血作为校准物：①用EDTA-K2抗凝剂的真空采血管取健康人新鲜 血（要求其RBC、WBC、Hb、Hct、PLT检测结果均在正常值范围内）IOml,血抗凝剂 的浓度为(L.5~2.2)g/ml。将新鲜血混匀后分装于洁净、无菌、带塞的3个试 管（或5ml大小的试剂瓶）内，每管的血量约为3ml:②取其中一管，用二级标准检 测系统或规范操作的检测系统连续检测11次，计算第2~11次检测结果的均值，以 此均值为新鲜血的定值：③其它2管新鲜血作为定值的校准物，用于仪器的校准。 3.校准物检测①取上述校准物1管（瓶），连续检测11次，第1次检测结果 不用，以防止携带污染：②仪器若无自动校准功能，则将第2~11次的各项(BC、 WBC、b、HCt、PLT)检测结果，记录在工作表格中，计算出均值（小数点后数字保 留位数较日常报告结果多一位)：④有自动校准功能的仪器可直接得出均值。 4.仪器校准判定将上述均值与校准物的定值比较以判别是否需要调整仪器。 ①按下列公式计算各参数的均值和定值的相对偏差（不计正负号）： 相对偏差%=[（均值一定值）/定值]×100% ②将计算好的偏差与表16-1中的判别标准进行比较。各参数均值与定值的差异 全部等于或小于表中的第一列数值时，仪器不需进行调整，记录检测数据即可；若 各参数均值与定值的差异大于表中的第二列数值时，需请维修人员核查原因并进行 处理：若各参数均值与定值的差异在表中第一列与第二列数值之间时，需对仪器进 行调整，调整方法按说明书的要求进行。若仪器无自动校准功能，则要计算需校准

续测定 11 次，分别计算第 2～11 次红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、红 细胞压积(Hct)、血小板(PLT)等 10 次结果的变异系数(CV)。 （3）携带污染率测定：任取一份正常人较高值（接近正常参考值上限）新鲜全 血(非校准物)在待校准仪器上连续测定 3 次，得高值 H1、H2、H3；将该份样本用稀释 液稀释 4 倍混匀得低值血标本，再在待校准仪器上连续测定 3 次，得低值 L1、L2、L3， 按下式计算： 污染率＝（L1- L3）/（H3- L3）×100% 2.校准物准备 （1）使用制造商提供的配套校准物：①将校准物在室温（18℃～25℃）下放置 15～30min；②观察校准物是否超出有效期，是否有变质或污染；③轻轻地将校准物 反复颠倒混匀，并置于两手间慢慢搓动，使其充分混匀；④将两瓶校准物合在一起， 混匀后再分装于 2 个瓶内（打开瓶塞时，应垫上纱布或软纸，使溅出的血液被吸收）。 （2）使用新鲜血作为校准物：①用 EDTA-K2 抗凝剂的真空采血管取健康人新鲜 血（要求其 RBC、WBC、Hb、Hct、PLT 检测结果均在正常值范围内）10ml，血抗凝剂 的浓度为（1.5～2.2）mg／ml。将新鲜血混匀后分装于洁净、无菌、带塞的 3 个试 管（或 5ml 大小的试剂瓶）内，每管的血量约为 3ml；②取其中一管，用二级标准检 测系统或规范操作的检测系统连续检测 11 次，计算第 2～11 次检测结果的均值，以 此均值为新鲜血的定值；③其它 2 管新鲜血作为定值的校准物，用于仪器的校准。 3.校准物检测 ①取上述校准物 1 管（瓶），连续检测 11 次，第 1 次检测结果 不用，以防止携带污染；②仪器若无自动校准功能，则将第 2～11 次的各项（RBC、 WBC、Hb、Hct、PLT）检测结果，记录在工作表格中，计算出均值（小数点后数字保 留位数较日常报告结果多一位）；④有自动校准功能的仪器可直接得出均值。 4.仪器校准判定 将上述均值与校准物的定值比较以判别是否需要调整仪器。 ①按下列公式计算各参数的均值和定值的相对偏差（不计正负号）： 相对偏差％＝[（均值—定值）/定值]×100﹪ ②将计算好的偏差与表 16-1 中的判别标准进行比较。各参数均值与定值的差异 全部等于或小于表中的第一列数值时，仪器不需进行调整，记录检测数据即可；若 各参数均值与定值的差异大于表中的第二列数值时，需请维修人员核查原因并进行 处理；若各参数均值与定值的差异在表中第一列与第二列数值之间时，需对仪器进 行调整，调整方法按说明书的要求进行。若仪器无自动校准功能，则要计算需校准

参数的新校准系数，将新的校准系数输入仪器替换原校准系数。 新校准系数的计算公式：新校准系数=原校准系数×（定值/仪器均值） 表161仪器校准的判别标准 相对偏差(%) 校准项日 第一列（士） 第二列（土） 10 1.0 HCT 2.0 公 MCV 1.0 PLT 3.0 15 5.0 5.校准结果判定将第二管（瓶）未用的校准物充分混匀，在仪器上重复检测 11次，去除第一次结果，计算第2~11次检测结果的均值，再次与表中的数值对照。 若各参数的差异全部等于或小于第一列数值，证明校准合格。如达不到要求，须请 维修人员进行检修。 注意事项 1.血细胞分析仪测定新鲜血重复性良好，是进行仪器校准的先决条件： 2.贮血用的试管或试剂瓶必须硅化或使用塑料制品： 3.应该用配套的校准物或质控物校准仪器。对无配套校准物的仪器的校准最好 使用有溯源性、准确定值的新鲜血。该新鲜血一定要在6h内使用，以保持校准物特 性的稳定： 4.用新鲜全血校准仪器虽较麻烦，但适用于所有仪器，特别是不易获得配套校 准品的仪器，成本较低，适用性强，尤其适用于同一实验室多台不同型号血细胞分 析仪的校准。 数据记录及处理 表16一2实验数据记录 仪器厂家： 型号： 仪器编号： 仪器校准前本底： RBC Hct MCV PLT MPY 仪器校准前重复性： WBC Hb RBC Het MCV PLT MPY 校准前携带污染率： WBC Hb RBC MCV PLT MPY 校准物来源： 性质：配套、新鲜血 批号 有效期：

参数的新校准系数，将新的校准系数输入仪器替换原校准系数。 新校准系数的计算公式：新校准系数＝原校准系数×（定值/仪器均值） 表 16-1 仪器校准的判别标准 校准项目 相 对 偏 差（%） 第一列（±） 第二列（±） WBC 1.5 10 RBC 1.0 10 Hb 1.0 10 HCT 2.0 10 MCV 1.0 10 PLT 3.0 15 MPV 5.0 20 5.校准结果判定 将第二管（瓶）未用的校准物充分混匀，在仪器上重复检测 11 次，去除第一次结果，计算第 2～11 次检测结果的均值，再次与表中的数值对照。 若各参数的差异全部等于或小于第一列数值，证明校准合格。如达不到要求，须请 维修人员进行检修。 注意事项 1.血细胞分析仪测定新鲜血重复性良好，是进行仪器校准的先决条件； 2.贮血用的试管或试剂瓶必须硅化或使用塑料制品； 3.应该用配套的校准物或质控物校准仪器。对无配套校准物的仪器的校准最好 使用有溯源性、准确定值的新鲜血。该新鲜血一定要在 6h 内使用，以保持校准物特 性的稳定； 4.用新鲜全血校准仪器虽较麻烦，但适用于所有仪器，特别是不易获得配套校 准品的仪器，成本较低，适用性强，尤其适用于同一实验室多台不同型号血细胞分 析仪的校准。 数据记录及处理 表 16－2 实验数据记录 仪器厂家： 型号： 仪器编号： 仪器校准前本底： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 仪器校准前重复性： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 校准前携带污染率： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 校准物来源： 性质：配套、新鲜血 批号： 有效期：

定值（粑值）： RBC PLT MPY 仪器测定校物均值： WBC RBC Het PLT 仪器相对偏差： PLT MPY 仪器原校准系数： RBC PLT 仪器新校准系数： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPY 校准结果的验证值： RBC PLT MPY 验证值的相对偏差： RBC PLT 校准结论： 调校者： 审核者： 时何： 思考题 1.哪些情况下要对血细胞分析仪进行校准？ 2.如何进行血细胞分析仪的校准？ 3.如何进行携带污染率测定？

定值（靶值）： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 仪器测定校物均值： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 仪器相对偏差： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 仪器原校准系数： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 仪器新校准系数： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 校准结果的验证值： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 验证值的相对偏差： WBC Hb RBC Hct MCV PLT MPV 校准结论： 调校者： 审核者： 时间： 思考题 1.哪些情况下要对血细胞分析仪进行校准? 2.如何进行血细胞分析仪的校准？ 3.如何进行携带污染率测定？