南京农业大学：《分子生物学》实验课程教学课件（讲稿）实验五 RT-PCR（逆转录）

分子生物学实验实验五RT-PCR逆转录

实验五 RT-PCR -逆转录

I实验目的掌握逆转录的基本原理和方法。逆转录也称反转录，是某些生物（如鸡的肉瘤病毒、HIV等）的特殊复制方式。它们的遗传信息载体是RNA而不是DNA。因此，在感染细胞时，首先经过逆转录作用成为双链DNA，才能整合到宿主基因组中去。这个过程由逆转录酶催化，它具有以RNA为模板合成DNA。逆转录现象和逆转录酶是分子生物学研究中的重大发现，是对经典中心法则重要补充。RNA反转泵酶5RNAA (第)3:RNA爵H（部分降解）缺口53DNA聚合融15DNA聚合酶10mmnDNA连接酬CDNA（第一链）53.CDNA（第一链）

一 实验目的 掌握逆转录的基本原理和方法。 逆转录也称反转录，是某些生物（如鸡的肉瘤病毒、HIV等）的特殊复制 方式。它们的遗传信息载体是RNA 而不是DNA。因此，在感染细胞时，首先经 过逆转录作用成为双链DNA，才能整合到宿主基因组中去。 这个过程由逆转录酶催化，它具有以RNA为模板合成DNA。 逆转录现象和逆转录酶是分子生物学研究中的重大发现，是对经典中心法则重 要补充

二 实验药品模板RNAdNTP随机引物反转录酶AMV或M-MLV5XbufferRnase Inhibitor

二 实验药品 模板RNA dNTP 随机引物 反转录酶AMV或M-MLV 5×buffer Rnase Inhibitor

二实验步聚反转录体系第一步:模板RNAxμL（浓度0.5-1μg/μL)2 μL4*gDNA wiper MixDEPC水6-x μL (to 8 μL)42℃→ 2min第二步：第一步反应液8μL2 μL5 X qRT SuperMix 1142℃85℃15min+2min

二 实验步聚 反转录体系 第一步： 模板RNA x μL （浓度0.5-1 μg/ μL） 4*gDNA wiper Mix 2 μL DEPC水 6-x μL (to 8 μL) 42℃ 2min 第二步： 第一步反应液 8μL 5×qRT SuperMix 11 2 μL 42℃ 15min 85 ℃ 2min

四 实验结果五 注意事项防止污染加样准确

四 实验结果 五 注意事项 防止污染 加样准确