南京农业大学：《兽医微生物学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验五 细菌的药敏试验

实验五 细菌的药敏试验 刘广锦 2025年6月10日星期二

刘广锦 2025年6月10日星期二

药物敏感试验（抗菌药物敏感性试验）(AntimicrobialSusceptibilityTest,AST)含义测定某株细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐药的一种体外试验；指在体外测定抗菌药物抑制或杀死细菌能力的试验。药敏实验的目的帮助指导临床用药，防止、延缓细菌耐药性产生细菌耐药谱的测定耐药菌株的动态监测新抗生素的评估

药物敏感试验（抗菌药物敏感性试验） （Antimicrobial Susceptibility Test，AST） ⚫ 含义 测定某株细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐药的 一种体外试验； 指在体外测定抗菌药物抑制或杀死细菌能力的试 验。 ⚫ 药敏实验的目的 帮助指导临床用药，防止、延缓细菌耐药性产生 细菌耐药谱的测定 耐药菌株的动态监测 新抗生素的评估

药敏试验的方法K-B纸片扩散法最低抑菌浓度试验Etest法自动化仪器法

药敏试验的方法 ⚫ K-B纸片扩散法 ⚫ 最低抑菌浓度试验 ⚫ Etest法 ⚫ 自动化仪器法

药敏试验的方法Kirby-Bauer Test（K-B纸片扩散法）：细菌涂布平板放置含某种药物的滤纸片根据纸片周围有无抑菌圈及直径大小，判断该菌对各种药物的敏感程度。WHO推荐的标准方法是K-B法，是目前广泛应用的方法

药敏试验的方法 ⚫Kirby-Bauer Test（K-B纸片扩散法）： 细菌涂布平板 放置含某种药物的滤纸片 根据纸片周围有无抑菌圈及直径大小，判断该菌对各种药物的 敏感程度。 WHO推荐的标准方法是K-B法，是目前广泛应用的方法

纸片扩散法优点：操作简便价格便宜药物选择灵活肉眼判断结果缺点：#影响因素多例如：培养基最适pH：7.2~7.4，碱性可扩大氨基糖苷类药物的抑菌圈，酸性可扩大四环素族药物的抑菌圈；琼脂含量影响抑菌圈的大小，每批琼脂平板需检测，合格后方可使用；药敏纸片的含药量不一致；保存不当等。01:27

缺点： 影响因素多 例如：培养基最适pH：7.2～7.4，碱性可扩大氨基糖苷类药物的抑 菌圈，酸性可扩大四环素族药物的抑菌圈； 琼脂含量影响抑菌圈的大小，每批琼脂平板需检测，合格 后方可使用； 药敏纸片的含药量不一致； 保存不当等。 优点： 操作简便 价格便宜 药物选择灵活 肉眼判断结果 01:27 纸片扩散法

最低抑菌浓度试验(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)将抗菌药物倍比稀释，在不同的稀释管内接种被检细菌，以能抑制细菌生长的最高稀释度作为该抗菌药物的最低抑菌浓度。稀释药物接种菌液37℃孵16~20h观察结果

最低抑菌浓度试验  （Minimum Inhibitory Concentration, MIC） 将抗菌药物倍比稀释，在不同的稀释管内接种被检 细菌，以能抑制细菌生长的最高稀释度作为该抗菌药物 的最低抑菌浓度。 稀释药物 接种菌液 观察结果 37℃孵育16～20h

最低抑菌浓度试验●优点：结果较准确有阴阳性结果和质控菌株做参考受影响因素：培养基的pH、渗透压及电介质接种菌量抗菌药物：用标准粉剂，不得使用口服药

⚫优点： 结果较准确 有阴阳性结果和质控菌株做参考 ⚫ 受影响因素： 培养基的pH、渗透压及电介质 接种菌量 抗菌药物：用标准粉剂，不得使用口服药 最低抑菌浓度试验

药敏试验/Etest法1988年，瑞典ABBIODISK公司推出是一种用于定量测定微生物药敏试验的抗菌药物梯度浓度试条；试条由5mm×50mm具刻度的薄塑料条和一预先制备的含抗菌药物梯度试条粘合组成

药敏试验/Etest法 1988年，瑞典ABBIODISK公司推出 是一种用于定量测定微生物药敏试验的抗菌药物 梯度浓度试条； 试条由5mm×50mm具刻度的薄塑料条和一预先制 备的含抗菌药物梯度试条粘合组成

Etest方法原理：将Etest试条放在已接种细菌的药敏平血上，其含药试条中的药物在平血中扩散，孵育一定时间后，形成椭圆形抑菌环，环边缘与刻度载体交界处即为抗菌药物抑制细菌生长的特定浓度(IC) 。适合大多数微生物的药敏试验，还可作耐药机制测定及联合抗菌药敏试验

原理： 将Etest试条放在已接种细菌的药敏平皿上，其 含药试条中的药物在平皿中扩散，孵育一定时间 后，形成椭圆形抑菌环，环边缘与刻度载体交界 处即为抗菌药物抑制细菌生长的特定浓度 （IC）。 Etest方法 适合大多数微生物的药敏试验，还可作耐药机制 测定及联合抗菌药敏试验

Etest方法的优点结合纸片法和MIC法的原理设计；对各种耐药表型如中低度耐药株，延迟表达耐药的菌株均可获得良好的效果；◆具有精确的MIC梯度

◆结合纸片法和MIC法的原理设计； ◆对各种耐药表型如中低度耐药株，延迟 表达耐药的菌株均可获得良好的效果； ◆具有精确的MIC梯度。 Etest方法的优点