南京农业大学：《兽医微生物学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验二 细菌的抹片制备及染色

实验二 细菌的抹片制备及染色 刘广锦 2025年6月10日

刘广锦 2025年6月10日

一、目的要求1.掌握细菌抹片的制备方法和无菌操作技术，2.掌握几种常用的染色方法和技术·3.巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态

一、目的要求  1. 掌握细菌抹片的制备方法和无菌操作技术  2. 掌握几种常用的染色方法和技术  3. 巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态

二、材料1、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌：液体枯草芽孢杆菌：斜面（固体） 2、革兰染色液，生理盐水·3、载玻片、接种棒、酒精灯等

二、材料  1、大肠杆菌与金黄色葡萄球菌：液体 枯草芽孢杆菌：斜面（固体）  2、革兰染色液，生理盐水  3、载玻片、接种棒、酒精灯等

三、制片及染色步骤·取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检抹片固定自然干燥水洗、干燥镜检染色

三、制片及染色步骤  取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检 抹片 自然干燥 固定 染色 水洗、干燥 镜检

1 玻片的处理：玻片应清晰透明、洁净而无油渍旧玻片有油，可用95%酒精擦洗，然后在酒精灯上灼烧。2.细菌抹片的制备：根据所用材料不同，抹片的方法也有差异。（可用记号笔在玻片背面圈出涂抹区域）（1）固体培养物用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水1-2环于清洁无油脂的载玻片中央，再经酒精灯火焰烧过的接种环勾取细菌的固体培养物少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小圆，均匀的抹片。也可直接刮取菌落涂在玻片上（2）液体培养物可直接用酒精灯火焰烧过的接种环勾取细菌培养物1-2环，涂抹于玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂片效果。涂抹后的接种环，酒精灯火焰烧过，充分灭菌

 1. 玻片的处理： 玻片应清晰透明、洁净而无油渍； 旧玻片有油，可用95%酒精擦洗，然后在酒精灯上灼烧。 2. 细菌抹片的制备： 根据所用材料不同，抹片的方法也有差异。 (可用记号笔在玻片背面圈出涂抹区域) （1）固体培养物 用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水1-2环于清洁无油脂 的载玻片中央，再经酒精灯火焰烧过的接种环勾取细菌的固体培养物 少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小圆，均匀的抹片。也 可直接刮取菌落涂在玻片上 （2）液体培养物 可直接用酒精灯火焰烧过的接种环勾取细菌培养物1-2环，涂抹于 玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂片效果。 涂抹后的接种环，酒精灯火焰烧过，充分灭菌

外焰一内焰图1-4细菌培养物的取材图1-3接种环的灭菌法

（3）组织涂片/触片用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压触或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。注意：无论何种方法切忌涂片太厚，宜轻不宜重，画同心圆，不要破坏细菌的正常排列，否则不利于染色和观察。3. 王燥:上述抹片应自然充分干燥

（3）组织涂片/触片 用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压触 或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻 片上。 注意：无论何种方法切忌涂片太厚，宜轻不宜重，画同心圆，不要破坏细菌 的正常排列，否则不利于染色和观察。 3. 干燥： 上述抹片应自然充分干燥

4.固定（1）目的:·1)、除去抹片上的水分，使菌体蛋白附着在载玻片上，以防染色过程中被水冲掉。·2)、使抹片易于着色，变性的蛋白质着色力强。·3)、杀死抹片中的微生物。·（2）方法:·1)、火焰固定：将已干燥的抹片菌膜面向上，以钟摆速度在酒精灯火焰上通过数次（以不烫手背为宜）。·2)、化学固定：用于组织触片，血液推片，加数滴甲醇于玻片上，固定2-3分钟后自然干燥

 4. 固定 （1）目的:  1)、除去抹片上的水分，使菌体蛋白附着在载玻片上，以防染色过程中被 水冲掉。  2)、使抹片易于着色，变性的蛋白质着色力强。  3)、 杀死抹片中的微生物。  （2）方法：  1)、火焰固定： 将已干燥的抹片菌膜面向上，以钟摆速度在酒精灯火焰上 通过数次（以不烫手背为宜）。  2)、化学固定：用于组织触片，血液推片，加数滴甲醇于玻片上，固定2-3 分钟后自然干燥

四、常用的几种染色方法1、革兰氏染色法采用多种染料，复杂染色法2、姬姆萨染色法3、瑞氏染色法只用一种染料，简单染色法·4、美兰染色法未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察，染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定

四、常用的几种染色方法  1、革兰氏染色法  2、姬姆萨染色法  3、瑞氏染色法  4、美兰染色法 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚 小，故在显微镜下极难观察 ，染色后细菌与环境形成鲜 明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结 构特征，而用以分类鉴定。 只用一种染料，简单染色法 采用多种染料，复杂染色法

1.革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（HansChristianGram，1853年一1938年）于1884年发明。GramtGram

 是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，这种染色法 是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年发明。 1. 革兰氏染色法 Gram+ Gram-