南京农业大学：《兽医微生物学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验四 细菌的分离培养及移植

实验四 细菌的分离培养及移植 刘广锦

刘广锦

目的要求1、掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法2、使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落3、复习实验二的染色镜检

一、目的要求  1、掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法  2、使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落  3、复习实验二的染色镜检

实验材料二、·菌种：细菌斜面细菌肉汤·培养基：LB平板、LB斜面、LB液体接种环、酒精灯、玻片、革兰染色试剂，光学显微镜

二、实验材料  菌种: 细菌斜面  细菌肉汤  培养基：LB平板、LB斜面、LB液体  接种环、酒精灯、玻片、革兰染色试剂，光学显微镜

镜检·无菌操作，挑取每个肉汤和斜面中的细菌·革兰染色：1.草酸铵结晶紫染色2min，水洗2.革兰氏碘液媒染2min，水洗·3.95%酒精脱色约30S，水洗·4.沙黄水溶液复染30s，水洗·5.干燥·镜检

镜检  无菌操作，挑取每个肉汤和斜面中的细菌  革兰染色：  1. 草酸铵结晶紫染色 2min，水洗  2. 革兰氏碘液媒染2 min，水洗  3. 95%酒精脱色约30 s，水洗  4. 沙黄水溶液复染30 s，水洗  5. 干燥  镜检

三、细菌的分离培养方法1、纯培养的获得与移植法纯培养：混合的细菌材料，在平板上划线培养（平板划线分离培养法），获得单独的菌落，再移植到其他培养基；移植：纯培养的细菌需要大量繁殖，这个过程就是移植。移植过程：平板/斜面一→肉汤2、芽胞需氧分离培养法80℃水浴15一20分钟，杀死不耐热的细菌繁殖体，再接种至平板，带芽孢的细菌可生长

三、细菌的分离培养方法 1、纯培养的获得与移植法  纯培养：混合的细菌材料，在平板上划线培养（平板划 线分离培养法），获得单独的菌落，再移植到其他培养基；  移植：纯培养的细菌需要大量繁殖，这个过程就是移植。 移植过程：平板/斜面→肉汤 2、芽胞需氧分离培养法： 80℃水浴15－20分钟，杀死不耐热的细菌繁殖体，再接种至平板，带芽 孢的细菌可生长

3、化学药品分离培养法：抑菌作用：培养基中加入青霉素抑制G+生长，以分离G-细菌杀菌作用：病料经15%硫酸处理，其他细菌皆被杀死，结核菌因抗酸存活鉴别作用：SS培养基可鉴别大肠杆菌和沙门氏菌4、实验动物分离培养法：易感动物攻毒再分离培养5、厌氧性细菌的培养法：生物学、化学和物理学3种方法消耗氧气，用于培养破伤风梭菌等严格厌氧菌

3、化学药品分离培养法：  抑菌作用：培养基中加入青霉素抑制G+生长，以分离G-细菌  杀菌作用：病料经15%硫酸处理，其他细菌皆被杀死，结核菌  因抗酸存活  鉴别作用：SS培养基可鉴别大肠杆菌和沙门氏菌 4、实验动物分离培养法： 易感动物攻毒再分离培养 5、厌氧性细菌的培养法： 生物学、化学和物理学3种方法消耗氧气， 用于培养破伤风梭菌等严格厌氧菌

二氧化碳培养法烛缸法化学法厌氧培养法厌氧工作站

厌氧培养法 厌氧工作站

实验内容平板划线法1肉汤→ 1平板/人外焰内爆主备种方式的奶载培器E

三、实验内容  1、平板划线法 肉汤→ 1平板/人 1 2 3 1 1 3 2 1 2 3

2、肉汤培养斜面→肉汤，每人一支3、斜面移植斜面一斜面，每人一支T0

2、肉汤培养 斜面→肉汤，每人一支 3、斜面移植 斜面→斜面，每人一支

标记接种完毕标明细菌、日期、班级、组名，第二天下午中抽时间看培养结果。培养平板倒置，平板试管置37℃，恒温箱培养24小时观察结果

标记  接种完毕标明细菌、日期、班级、组名，第二天下午 抽时间看培养结果。 培养 观察结果 平板倒置，平板试管置37℃，恒温箱培养24小时