南京农业大学：《兽医微生物学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验七 PCR反应

实验七PCR反应刘广锦2025年6月10日星期二

刘广锦 2025年6月10日星期二

聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction,PCR）·实验原理·实验材料·实验步骤·实验结果观察·PCR反应的影响因素实验注意事项

聚合酶链式反应 （Polymerase Chain Reaction, PCR）  实验原理  实验材料  实验步骤  实验结果观察  PCR反应的影响因素  实验注意事项

PCR反应体系一、PCR的基本原理PCR过程PCR的特点聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction,PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制。标准的PCR反应体系PCRmix（taq酶，dNTP，Mg2+及染料）引物各10~100pmol模板DNA0.1~2ug

一 、PCR的基本原理 • PCR反应体系 • PCR过程 • PCR的特点 标准的PCR反应体系 4种dNTP混合物 各200umol/L DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug PCR mix（taq酶，dNTP, Mg 2+及染料 ） 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）是体外酶促合成特异 DNA片段的一种方法，其基本原理为DNA的半保留复制

PCR反应体系PCR过程PCR的基本原理PCR的特点只有在模板和引物相对应的情况下，PCR反应完成后才会有特异性条带的出现。因此应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分

PCR的基本原理 • PCR反应体系 • PCR过程 • PCR的特点 只有在模板和引物相对应的情况下，PCR反应完成后才会有特异性条带 的出现。因此应用此方法，可以特异性地检测样品中痕量的特定DNA成分

PCR反应体系PCR过程PCR的基本原理PCR的特点23高温变性低温退火适温延伸重复1~3步25~30轮94形成2条单链温度目的DNA片段DNA变性72扩增100万倍以上子链延伸(℃)DNA加倍55DNA单链与引物复性22DNA双螺旋2345时间（min）

1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温 度 （℃） PCR的基本原理 • PCR反应体系 • PCR过程 • PCR的特点 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 D N A 变 性 形 成 2 条 单 链 子链延伸 DNA加倍

95℃模板DNA

PCR的基本原理  PCR反应条件  PCR过程  PCR的特点 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温 度 （℃） 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 子链延伸 DNA加倍 D N A 变 性 形 成 2 条 单 链 模板DNA 95℃

50℃TTTTT1引物1DNA引物引物21

PCR的基本原理  PCR反应条件  PCR过程  PCR的特点 50℃ 引物1 引物2 DNA引物

72℃TTaq酶引物1DNA引物引物2Taq酶[

PCR的基本原理  PCR反应条件  PCR过程  PCR的特点 引物1 引物2 DNA引物 72℃ Taq酶 Taq酶

95℃第1轮结束第2轮开始FL

PCR的基本原理  PCR反应条件  PCR过程  PCR的特点 第1轮结束 95℃ 第2轮开始

50℃lagTagITPTagad

PCR的基本原理  PCR反应条件  PCR过程  PCR的特点 Taq 50℃ Taq Taq Taq