南京农业大学：《兽医微生物学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验三 培养基的制备

实验三 培养基的制备刘广锦

刘广锦

目的要求：掌握基础培养基制备的原则和要求；1、·2、掌握一般培养基的制备过程及pH的测定实验材料：二、器皿、pH试纸、试剂等

一、 目的要求：  1、 掌握基础培养基制备的原则和要求;  2、 掌握一般培养基的制备过程及pH的测定 二、 实验材料： 器皿、pH试纸、试剂等

培养基的种类及用途固体培养基：分离培养、纯培养、保存菌种：1(含1.5-2%琼脂)2、半固体培养基：细菌运动力的检查；(含0.2-0.5%琼脂)·3、液体培养基：观察细菌的生长状况、保存菌种。(不含琼脂)

二 培养基的种类及用途  1、固体培养基：分离培养、纯培养、保存菌种； (含1.5-2%琼脂) ⚫ 2、半固体培养基：细菌运动力的检查； (含0.2-0.5%琼脂)  3、液体培养基：观察细菌的生长状况、保存菌种。 (不含琼脂)

三、培养基制作的注意事项·1、细菌生长所需的营养物质·2、盛器不含抑菌物。3、必须符合生长要求，弱碱性（pH7.2-7.6）·4、要过滤，应为半透明或透明·5、制好后需高压灭菌，后续试验必须保持无菌6、培养基中某些成分（血清、氨基酸、酶类等），在高温下易分解、变性，应无菌过滤（o.22um滤膜）后按规定温度加入培养基中

三、培养基制作的注意事项  1、细菌生长所需的营养物质  2、盛器不含抑菌物  3、必须符合生长要求，弱碱性（pH7.2-7.6）  4、要过滤，应为半透明或透明  5、制好后需高压灭菌，后续试验必须保持无菌  6、培养基中某些成分（血清、氨基酸、酶类等），在高 温下易分解、变性，应无菌过滤（0.22μm 滤膜）后按规 定温度加入培养基中

四、培养基制备的一般过程·按量称取→溶解→调pH→分装→灭菌→菌检

四、培养基制备的一般过程 按量称取→溶解→调pH →分装→灭菌→菌检

LB液体培养基制备（Lysogenybroth）1、按量称取:蛋白陈（Tryptone）6克酵母提取物（yeastextract）3克NaCI 6克加去离子水 500ml，充分溶解2、调pH:用1MNaOH边加边搅拌，不时用pH试纸测试；当pH接近7时，改用0.1MNaOH，直至pH值至7.4~7.63、加去离子水定容至600ml4、分装：每组10根试管，3ml/管，捆扎标记5、灭菌（121 ℃，20-30分钟）

LB 液体培养基制备 (Lysogeny broth) 1、按量称取： 蛋白胨（Tryptone）6克 酵母提取物（yeast extract）3克 NaCl 6克 加去离子水 500ml，充分溶解 2、调pH： 用1M NaOH边加边搅拌，不时用pH试纸测试； 当pH接近7时，改用0.1M NaOH，直至pH值至7.4~7.6 3、加去离子水定容至600ml 4、分装： 每组10根试管，3ml/管，捆扎标记 5、灭菌（121 ℃，20-30分钟）

LB固体培养基的制备固体斜面：。测好pH后，用量筒取LB液体液体培养基500ml，倒入锅中称量10克琼脂（2%）；·边加热边搅动（勿溢出），看一下水位，补足水分；。待琼脂完全溶解后，每组分装10根长管，8ml/管；。捆扎标记，剩余培养基装入广口瓶中，灭菌（121 ℃，20-30分钟）；·趁热将试管口一端搁在玻棒上，倾斜放置，冷却凝固

LB固体培养基的制备 固体斜面：  测好pH后，用量筒取LB液体液体培养基500ml ，倒入锅中， 称量10 克琼脂（2%）；  边加热边搅动（勿溢出），看一下水位，补足水分；  待琼脂完全溶解后，每组分装10根长管，8ml/管；  捆扎标记，剩余培养基装入广口瓶中，灭菌（121 ℃，20- 30分钟）；  趁热将试管口一端搁在玻棒上，倾斜放置，冷却凝固

LB固体培养基的制备LB平板:·趁热取出高压灭菌好的固体培养基；·在超净台中，倾倒平皿，15-20 ml/块，在桌面上轻轻回转平血皿，使培养基平铺于皿底；每组10块无菌平皿;。放置冷却，密封保存

LB固体培养基的制备 LB平板：  趁热取出高压灭菌好的固体培养基；  在超净台中，倾倒平皿，15-20 ml/ 块，在桌面上轻轻 回转平皿，使培养基平铺于皿底；  每组10块无菌平皿；  放置冷却，密封保存

五、作业1、制作培养基时应注意哪几点？2、液体培养基与固体培养基各有什么用途？拉

五、作业  1、制作培养基时应注意哪几点？  2、液体培养基与固体培养基各有什么用途？

蛋白陈水葡萄糖蛋白陈水葡萄糖··蛋白陈1 g2 g蛋白陈·1g? NaCl0.5 g: K2HPO4 0.4g·水100ml·水200ml: pH 7.2-7.4· pH 7.2-7.43ml/管，分装30管6ml/管，分装30管·用途:·用途：靛基质（吲哚）试验用于M.R 和V.P.试验用

葡萄糖蛋白胨水  葡萄糖 1 g  蛋白胨 1 g  K2HPO4 0.4 g  水 200ml  pH 7.2-7.4 6ml/管，分装30管  用途: 用于M.R 和V.P.试验用 蛋白胨水  蛋白胨 2 g  NaCl 0.5 g  水 100ml  pH 7.2-7.4 3ml/管，分装30管  用途: 靛基质（吲哚）试验