南京农业大学：《分子生物学》实验课程教学课件（讲稿）实验四 动物组织中RNA的提取

分子生物学实验实验四动物组织中RNA的提取

实验四 动物组织中RNA的提取

实验目的了解RNA提取的原理和基本方法

实验目的 了解RNA提取的原理和基本方法

实验原理不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解，释放出RNA，并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质，最终获得高纯度RNA产物的过程

实验原理 不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解，释放出 RNA，并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质，最终 获得高纯度RNA产物的过程

提取方法苯酚法，去污剂法，盐酸胍法TRNzol提取法1、总RNA提取试剂，破碎溶解细胞时能保持RNA的完整性。（细胞裂解，释放RNA)2、当加入氯仿，它可抽提酸性苯酚，而酸性苯酚促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离（RNA在水相）。3、异丙醇可沉淀回收水相层中RNA

苯酚法，去污剂法，盐酸胍法 TRNzol提取法 1、总RNA提取试剂，破碎溶解细胞时能保持RNA的完整性。（细胞裂解，释 放RNA） 2、当加入氯仿，它可抽提酸性苯酚，而酸性苯酚促使RNA进入水相，离心后 可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离 （RNA在水相）。 3、异丙醇可沉淀回收水相层中RNA。 提取方法

实验药品动物肝脏组织（鸡）TRNzol试剂(异硫氰酸胍+苯酚，8-羟基喹啉，β-巯基乙醇)氯仿异丙醇DEPC（焦碳酸二乙酯，RNA酶抑制剂）乙醇

实验药品 动物肝脏组织（鸡） TRNzol 试剂 (异硫氰酸胍+苯酚， 8-羟基喹啉，β-巯基乙醇) 氯仿 异丙醇 DEPC （焦碳酸二乙酯，RNA酶抑制剂） 乙醇

取0.1g肝脏于2mLdoff管中，向其中加入1mLTRNzol实验步聚组织进行匀浆，匀浆液室温放置5min14℃，12000rpm、离心10min,取上清[800μL左右]A上清中加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15s14℃，12000rpm、离心10min，（黄色的有机色，中间层和上层无色的水相）1取无色水相400uL于新的1.5mLdoff管中1向其中加入400μL异丙醇[与上清等体积」，混匀1min，-20℃放置30minA4℃，12000rpm、离心10min，去上清1加入1mL75%乙醇（DEPC处理过的水配置）进行洗涤A4℃，12000rpm、离心10min，去上清室温放置晾干，加入15/30μLDEPC水溶解，紫外定量

取0.1 g肝脏于2 mL doff管中，向其中加入1 mLTRNzol  组织进行匀浆，匀浆液室温放置5 min  4 ℃，12000 rpm、离心10 min,取上清[800 µL左右］  上清中加入0.2 mL氯仿，剧烈振荡15 s  4 ℃，12000 rpm、离心10 min，（黄色的有机色，中间层和上层无色的水相）  取无色水相400µL于新的1.5 mL doff管中  向其中加入400 µL异丙醇[与上清等体积］，混匀1 min，-20 ℃放置30 min  4 ℃，12000rpm、离心10min，去上清  加入1 mL 75%乙醇（DEPC处理过的水配置）进行洗涤  4 ℃，12000 rpm、离心10 min，去上清  室温放置晾干，加入15/30 µL DEPC水溶解，紫外定量 实验步聚