南京农业大学：《兽医免疫学》实验课程教学课件（PPT讲稿）实验五 血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验

南京发业大学NANJING AGRICULTURALUNIVERSITY实验五血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 实验五 血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验

南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY一、实验目的1.了解血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验的原理：2.掌握血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验的操作方法;3.学会血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验结果的判定

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 一、实验目的 1.了解血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验的原理； 2.掌握血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验的操作方法； 3.学会血凝（HA）和血凝抑制（HI）实验结果的判定

南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY血凝（HA）实验血凝现象：有些病毒表面有血凝素，可凝集人,鸡,豚鼠等动物红细胞(red bloodcell,RBC)。原理：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集；用途：①滴定病毒的血凝效价，为血凝抑制实验做准备；②确定病毒的存在；凝集效价：能使血球产生凝集的病毒最高稀释度为病毒的凝集效价，即病毒液含1个血凝单位。在病毒血凝抑制实验中，一般用4个血凝单位。100%凝集：血球呈颗粒伞状凝集沉于孔底不凝集：血球沉于孔底呈点状

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝（HA）实验 血凝现象：有些病毒表面有血凝素，可凝集人,鸡,豚鼠等动物红细胞 （ red blood cell，RBC）。 原理：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集； 用途：①滴定病毒的血凝效价，为血凝抑制实验做准备； ②确定病毒的存在； 凝集效价：能使血球产生凝集的病毒最高稀释度为病毒的凝集效价， 即病毒液含1个血凝单位。在病毒血凝抑制实验中，一般用4个血凝单位。 100%凝集：血球呈颗粒伞状凝集沉于孔底 不凝集：血球沉于孔底呈点状

发业大学核蛋白RALUNIVERSITY(RNA)神经氨酸酶类脂膜衣壳血凝素血凝素是指红血球凝聚素，呈柱状，能与人、鸟、猪、豚鼠等动物红细胞表面的受体相结合引起凝血，故而被称作血凝素。篦麻，洋扁豆等含有植物血凝素

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝素是指红血球凝聚素，呈柱状，能与人、鸟、猪、豚鼠等 动物红细胞表面的受体相结合引起凝血，故而被称作血凝素。 蓖麻，洋扁豆等含有植物血凝素

南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY血凝（HA）实验示意图病毒颗粒红细胞

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝（HA）实验示意图

南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY（HI）实验血凝抑制血凝抑制现象：血凝素抗体使病毒失去凝集红细胞能力的现象。作为临床检测实验，可用于检测血清中抗体含量或鉴定病毒。称为血凝抑制实验。原理：Ab与血凝素结合，封闭血凝素，使之不能与RBC结合，凝集RBC。而凝抑制效价：能完全抑制血球凝集的最高血清稀释度即为该血清的血凝抑制效价。抗原抗体I am late!

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝抑制（HI）实验 血凝抑制现象：血凝素抗体使病毒失去凝集红细胞能力的现象。作 为临床检测实验，可用于检测血清中抗体含量或鉴 定病毒。称为血凝抑制实验。 原理：Ab与血凝素结合，封闭血凝素，使之不能与RBC结合，凝集RBC。 血凝抑制效价：能完全抑制血球凝集的最高血清稀释度即为该血清 的血凝抑制效价

南京发业大学NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY二、实验材料1.新城疫病毒液及阳性血清2.1%鸡红细胞3.生理盐水4.96孔V型微量反应板5.微量移液器，tip头

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 二、实验材料 1. 新城疫病毒液及阳性血清 2. 1%鸡红细胞 3. 生理盐水 4. 96孔V型微量反应板 5. 微量移液器, tip头

三、 实验操作及结果判定南京发业大学NANJING AGRICULTURALUNIVERSITY血凝实验（HA)表25-1血细胞凝集（HA）试验术式表67S910111245孔号23血细胞1:81:321:641:1281:2561:5121:10241:2048病毒稀释度1:21:41:16对照505050So50505050生理盐水（μL)505050501550SO505050505050弃去5050病毒（μL）1%鸡红细胞505050505050505050505050(μL)37℃15~30min##+####+++++判定结果#从表25-1看出，本病毒的血凝价为1：128，则1:128的0.1mL中有1个凝集单位，1:64、1:32分别为2、4个凝集单位。或将128/4=32，即1:32为4个凝集单位，第12孔为血球对照应不凝集

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝实验（HA） 三、实验操作及结果判定

取微量反应板，按以下步骤操作：南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY（1）一排1-12孔各加生理盐水25uL；（2）吸25ul病毒液于第1孔，混匀后取25uL至第2孔，依次稀释至第10孔，弃去25uL，各孔经2倍比稀释后稀释度依次为2-1至2-10，第11和12个孔不加病毒液，作为红细胞对照；（3）1-12孔各加1%鸡红细胞25uL，震荡2min混匀。（4）37℃静置15min，观察结果；孔号89456710231112125生理盐水2525252525252525252525(UL)Cn?+2522225225疾壳液251:81:161321:641:1281:2561:512病毒稀释1024度鸡红血球每孔25细胞悬液(μL)

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 取微量反应板，按以下步骤操作： （1）一排1-12孔各加生理盐水25μL； （2）吸25ul病毒液于第1孔，混匀后取25μL至第2孔，依次 稀释至第10孔，弃去25μL，各孔经2倍比稀释后稀释度依次为 2 -1至2 -10 ，第11和12个孔不加病毒液，作为红细胞对照； （3）1-12孔各加1%鸡红细胞25μL，震荡2min混匀。 （4）37℃静置15min，观察结果；

南京发业大学NANJINGAGRICULTURALUNIVERSITY血凝实验（HA)·结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以实验中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，1作为病毒的血凝价，即HA效价。++++++++++

NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY 血凝实验（HA） • 结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以实 验中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀 释倍数，作为病毒的血凝价，即HA效价