南京农业大学：《动物生物化学》实验教学课件（讲稿）实验四 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳

南京農业大学动物生物化学实验实验四电泳技术概论血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳动物医学院动物生化教研室GelBuffersolution

1 实验四 电泳技术概论 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 动物医学院动物生化教研室 动物生物化学实验

一、实验目的D了解电泳的概念和一般原理：②掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术③判别动物血清中各种蛋白组分

2 ① 了解电泳的概念和一般原理； ② 掌握醋酸纤维薄膜电泳的操作技术； ③ 判别动物血清中各种蛋白组分 一、实验目的

实验原理一电泳Electrophoresis带电颗粒在电场的作用下向着与其所带电荷相反的方向迁移的现象。MixtureofmacromoleculesElectrophoresisDirection ofelectrophoresisPorousgel不同溶质由于所带电荷性质，数量以及分子大小、形状不同，在电场中的泳动方向和速度不同而被分离，同向电泳与电泳速度（mobility）有关，一般称迁移率

3 二、实验原理 电泳 Electrophoresis 带电颗粒在电场的作用下向着与其所带电荷相反的 方向迁移的现象。 不同溶质由于所带电荷性质，数量以及分子大小、形状不同，在电场中的 泳动方向和速度不同而被分离. 同向电泳与电泳速度（mobility）有关，一般称迁移率

电泳迁移率（Mobility，m）电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度：所以:Uqmm6元rnE式中r是球状分子的半径，n是缓冲液粘度，v是电泳速度(=d /t，单位时间粒子运动的距离，cm/s）。由上式可以看出，迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的粘度成反比

4  式中r是球状分子的半径，η是缓冲液粘度，υ是电泳速度(υ= d / t，单位时间粒 子运动的距离，cm / s )。 E m υ  πrη q m 6  电泳迁移率（m）是指在单位电场强度（1V/cm）时带电分子的迁移速度： 所以： 由上式可以看出，迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小 和缓冲液的粘度成反比。 电泳迁移率（Mobility，m）

电泳分类按支持介质的不同可分为：(1)纸电泳（Paperelectrophorisis)(2)醋酸纤维薄膜电泳（CelluloseAcetateelectrophoresis）(3）琼脂凝胶电泳（AgarGelelectrophoresis）（4）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PolyacrylamideGelelectrophoresisPAGE）(5)SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS一PAGE）

5 电泳分类 ⑴ 纸电泳（Paper electrophorisis） ⑵ 醋酸纤维薄膜电泳（Cellulose Acetate electrophoresis） ⑶ 琼脂凝胶电泳（Agar Gel electrophoresis） ⑷ 聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel electrophoresis PAGE ） ⑸ SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）。 按支持介质的不同可分为：

按支持介质形状不同可它为(1)薄层电泳：(2)板电泳（水平和垂直）；(3)圆盘柱状电泳按用途不同可分为(1)分析电泳；(2)制备电泳；(3)定量免疫电泳；按所用电压不同可分为(1)低压电泳：100V～500V，电泳时间较长(2)高压电泳：1000V～5000V，电泳时间短

6 按支持介质形状不同可它为 ⑴ 薄层电泳 ； ⑵ 板电泳（水平和垂直） ； ⑶圆盘柱状电泳 按用途不同可分为 ⑴ 分析电泳； ⑵ 制备电泳； ⑶ 定量免疫电泳； 按所用电压不同可分为 ⑴ 低压电泳：100V～500V，电泳时间较长 ⑵ 高压电泳：1000V～5000V，电泳时间短

影响电泳分离的主要因素1.待分离生物大分子的性质（各自的电荷和形状大小）2.缓冲液的性质（缓冲液的pH值，缓冲液的离子强度）3.电场强度（Vlcm）是每cm的电位降，也称电位梯度。与电泳速度正比。4.电渗（液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象）5.支持介质的筛孔

7 影晌电泳分离的主要因素 1.待分离生物大分子的性质（各自的电荷和形状大小 ） 2. 缓冲液的性质（缓冲液的pH值，缓冲液的离子强度 ） 3.电场强度 （V/cm）是每cm的电位降，也称电位梯度。与电泳速度正比。 4. 电渗 （液体在电场中，对于固体支持介质的相对移动，称为电渗现象 ） 5. 支持介质的筛孔

电泳装置纯压特或型电求0002006421电泳系统

8 电泳系统 电泳装置

醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜作为支持介质云酸牛维素海膜

9 醋酸纤维薄膜电泳 以醋酸纤维薄膜作为支持介质

醋酸纤维薄膜分离血清蛋白质的基本原理COONH,*NH,*NH,*COOHCOOOH+H+PrprPrNH3+COO-NH3*NH2COO-COO-pHplpH=pl(+)(-)(0)人血清蛋白质的等电点清蛋白pI=4. 88pI=5. 06α 1-球蛋白α 2-球蛋白pI=5.06β-球蛋白pI=5. 12-球蛋白pI=6.85-7. 5010

10 人血清蛋白质的等电点 清蛋白 pI=4.88 α1-球蛋白 pI=5.06 α2-球蛋白 pI=5.06 β-球蛋白 pI=5.12 γ-球蛋白 pI=6.85-7.50 醋酸纤维薄膜分离血清蛋白质的基本原理 Pr COO￾COO￾NH3 + NH3 + Pr COO￾COO- NH2 NH3 + Pr COOH COO- NH3 + NH3 + +H+ OH￾pH=pI (0) pHpI (-)