厦门大学：《细胞与显微技术实验》课程教学资源（讲义）细胞凝集反应

《细胞与显微技术实验》细胞凝集反应实验十一

实验十一 细胞凝集反应 《细胞与显微技术实验》

一、实验目的和要求了解细胞膜的表面结构；心掌握凝集素促使细胞凝集的原理；?学习研究细胞凝集反应的方法

 了解细胞膜的表面结构； 掌握凝集素促使细胞凝集的原理； 学习研究细胞凝集反应的方法。 一、实验目的和要求

二、实验原理&细胞质膜：蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构糖蛋白和糖脂分子：蛋白质和脂类与糖链结合形成X细胞外被：又称糖萼，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链研究表明，细胞间的分子识别、细胞生长和分化、免疫反应和肿瘤发生等均与细胞外被有关。糖链膜外表面亲水基磷脂双分子层疏水基蛋白质胆固醇受体分子膜内表面膜通道蛋白细胞膜的液体镶嵌模型

 细胞质膜：蛋白质不同程度镶嵌在脂双层中所形成的动态流动结构  糖蛋白和糖脂分子：蛋白质和脂类与寡糖链结合形成  细胞外被：又称糖萼，糖蛋白和糖脂分子伸至细胞表面的分枝状寡糖链 研究表明，细胞间的分子识别、细胞生长和分化、免疫反应和肿瘤发生 等均与细胞外被有关。 二、实验原理

二、实验原理凝集素（lectin）是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已无脊发现近干种植物中含有凝集素，在各种真菌、椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的有植物凝集素（phytohemagglutinin，PNA），通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称

 凝集素（lectin）是一类可逆结合特异糖基的蛋白 质，具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已 发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊 椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某 些病毒体内也含有凝集素。常用的有植物凝集素 （phytohemagglutinin, PNA），通常一起被提取 的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花 生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。 二、实验原理

二、实验原理细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。凝集素使细胞凝集的原理是：它可以与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定

 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则 的细胞团。  凝集素使细胞凝集的原理是：它可以与细胞表面的糖 分子连接，在细胞间形成“桥”的结果。人们利用凝 集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究 不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。 二、实验原理

三、实验用品1.材料土豆块茎、家兔。2. 器具：显微镜、电子天平、离心管、细滴管、载片、盖片。3. 试剂：PBS缓冲液：NaCI7.2g、Na,HPO41.48g、KH,PO40.43g，加蒸馏水，定容至1L，调pH至7.2。1%肝素液：0.1g肝素溶解于10mL0.9%氯化钠溶液中。0.9%NaC液

三、实验用品 1. 材料 土豆块茎、家兔。 2. 器具: 显微镜、电子天平、离心管、细滴管、载片、盖片。 3. 试剂: PBS缓冲液：NaCl 7.2 g、Na2HPO4 1.48 g、KH2PO4 0.43 g，加蒸馏水，定容至1 L，调pH至7.2。 1%肝素液：0.1 g肝素溶解于10 mL 0.9%氯化钠溶液中。 0.9% NaCl液

四、实验步骤1.2%家兔红细胞悬液的制备以无菌方法抽取免子耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1%肝素溶液）1mL，用生理盐水洗5次，每次3000r/min，离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。2.凝集素制备土豆块茎：称取去皮土豆块茎2g，切成薄片，加10mLPBS缓冲液浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性士豆凝集素。3.细胞凝集反应土豆凝集素1滴、2%免血红细胞液1滴，在载玻片上混匀，静置20min；以PBS缓冲液加2%血细胞悬液作为对照，低倍镜下观察

1. 2%家兔红细胞悬液的制备 以无菌方法抽取兔子耳缘静脉血液（5 mL注射器先吸取3 mL 1%肝素 溶液）1 mL，用生理盐水洗5次，每次3000 r/min，离心5 min，最后按 沉淀的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。 2. 凝集素制备 土豆块茎： 称取去皮土豆块茎2 g，切成薄片， 加10 mL PBS缓冲液， 浸泡2 h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。 3. 细胞凝集反应 土豆凝集素1滴、2%兔血红细胞液1滴，在载玻片上混匀，静置20 min；以PBS缓冲液加2%血细胞悬液作为对照，低倍镜下观察。 四、实验步骤

五、结果观察心低倍镜下可以看到对照组红细胞分布均一，无凝集；实验组中红细胞凝集在一起对照阳性

 低倍镜下可以看到对照组红细胞分布均一，无凝集；实验 组中红细胞凝集在一起。 五、结果观察 对照 阳性

六、实验报告及思考题1.绘图简图表示血细胞凝集过程，并说明原因。2.哪些因素影响细胞凝集反应？3.结合凝集素的特性，简述凝集素在生物学中有何应用？研究凝集素有何意义？

六、实验报告及思考题 1. 绘图简图表示血细胞凝集过程，并说明原因。 2. 哪些因素影响细胞凝集反应? 3. 结合凝集素的特性，简述凝集素在生物学中有何应用？ 研究凝集素有何意义？