厦门大学：《细胞与显微技术实验》课程教学资源（讲义）冰冻切片法

实验十六冰冻切片法厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

实验十六 冰冻切片法

T一、实验目的1.了解冰冻切片技术在细胞生物学研究中的应用2.掌握冰冻切片技术。厦门大学生命科学国家级实验教尔范中心

一、实验目的 1.了解冰冻切片技术在细胞生物学研究中的应用。 2.掌握冰冻切片技术

冰冻切片简介冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。因其制作过程较石蜡切片相对简便、快捷，主要应用于手术中快速病理诊断。快速冰冻切片主要用于下列几种情况：①确定病变是否为肿瘤及恶性程度等；②脂肪及类脂及部分蛋白质等物质染色：厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

冰冻切片简介  冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定 的硬度, 然后进行切片的一种方法。因其制作过程较石 蜡切片相对简便、快捷, 主要应用于手术中快速病理诊 断。  快速冰冻切片主要用于下列几种情况： ①确定病变是否为肿瘤及恶性程度等； ②脂肪及类脂及部分蛋白质等物质染色；

猪肉脂肪组织染色三、实验材料、试剂与器材1.材料：新鲜猪肉2.试剂：：70%酒精苏丹黑B染液、eice甘油明胶等3.器材：冰冻切片机冰冻切片机厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

三、实验材料、试剂与器材 1.材料：新鲜猪肉 2.试剂：70%酒精、 苏丹黑B染液、 甘油明胶等 3.器材： 冰冻切片机 冰冻切片机 猪肉脂肪组织染色

冰冻切片步骤1.取材固定V2.切片3.染色厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

冰冻切片步骤 1.取材 2.切片 3.染色 固定

冰冻切片样品处理鲁一1.非固定样品：取样后用OTC包埋，在预冷的异戊醇中速冻后保存在超低温冰箱中：切片前复温，切片后固定2.固定样品：灌注固定+固定液浸泡利用高渗溶液吸收组织分子：将组织置于20%一一30%的蔗糖溶液中，置4摄氏度冰箱足够时间，观察组织块，待其沉底后，取出切片。切片时，根据组织不同，合理选择箱体及切片头温度厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

冰冻切片样品处理 1.非固定样品： 取样后用OTC包埋，在预冷的异戊醇中速冻后， 保存在超低温冰箱中:切片前复温，切片后固定 2.固定样品： 灌注固定+固定液浸泡 利用高渗溶液吸收组织分子： 将组织置于20% ——30%的蔗糖溶液中，置4摄 氏度冰箱足够时间，观察组织块，待其沉底 后，取出切片。 切片时，根据组织不同，合理选择箱体及切片头温度

一四、实验的基本程序1. 取 材:取新鲜的组织。（组织块可不加任何处理直接进行冰冻切片）。2.固定：组织块也可以固定于10%中性福尔马林厦门大学生命科学国家级实验教尔范中心

1. 取 材：取新鲜的组织。（组织块可不加任何处理， 直接进行冰冻切片）。 2. 固 定：组织块也可以固定于10%中性福尔马林。 四、实验的基本程序

3.切片：（1）利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度：调整切片角度，安装切片刀。(2）将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到冷台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。(3）将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出后染色观察。厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

3.切 片： (1) 利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度， 调整切片角度，安装切片刀。 (2) 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到冷 台上冷冻，在即将完成冷透前用热交换装置压平。 (3) 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移 近刀口，利用慢进按钮开始修片，修好后即可放 下防卷板切片，使切出的样品进入防卷板与刀片 的狭缝，取出后染色观察

一4.染色一显示脂类的苏丹黑B法：(1)于70%酒精略洗。(2)苏丹黑B染液5-15分钟。(3)70%酒精洗去多余染料。(4)稍水洗。(5)甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖。厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

4.染色—显示脂类的苏丹黑B法： (1)于70%酒精略洗。 (2) 苏丹黑B染液5-15分钟。 (3) 70%酒精洗去多余染料。 (4) 稍水洗。 (5) 甘油明胶或阿拉伯糖胶封盖

五、实验结果在显微镜下观察，可看到密集成群的圆形或多角形的空泡，即脂肪细胞。厦门大学生命科学国家级实验教术范中心

五、实验结果 在显微镜下观察，可看到密集成群的圆形 或多角形的空泡，即脂肪细胞