厦门大学：《细胞与显微技术实验》课程教学资源（讲义）植物细胞液泡系与细胞骨架的观察

实验五植物细胞液泡系与细胞骨架的染色与观察

实验五 植物细胞液泡系与 细胞骨架的染色与观察

一、相关概念与原理1植物细胞与动物细胞区别植物细胞：细胞壁、叶绿体、大液泡动物细胞：中心体2细胞骨架指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，是由微管、微丝和中间纤维组成的体系功能：维持细胞的一定形态；细胞内物质运输和细胞器的移动；帮助细胞运动；指导细胞壁合成等

一、相关概念与原理 1 植物细胞与动物细胞区别 植物细胞：细胞壁、叶绿体、大液泡 动物细胞：中心体 2 细胞骨架 指真核细胞中的蛋白纤维网架体系，是由微管、微丝和 中间纤维组成的体系。 功能：维持细胞的一定形态；细胞内物质运输和细胞器 的移动；帮助细胞运动；指导细胞壁合成等

3细胞骨架染色用TritonX-100处理细胞，抽提掉细胞质内结合在膜结构上的蛋白质，而骨架蛋白得以保存戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，可以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。4液泡系染色中性红是一种弱碱性pH指示剂，pH6.4~8.0时，由红变黄。中性或弱碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红到液泡中；液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色田胞核与细胞质不着色

3 细胞骨架染色 用Triton X-100处理细胞，抽提掉细胞质内结合在膜结构 上的蛋白质，而骨架蛋白得以保存。 戊二醛固定，蛋白质的特异性染料考马斯亮蓝染色后，可 以在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。 4 液泡系染色 中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，pH6.4～8.0时，由红变 黄。 中性或弱碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红到 液泡中；液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，中性红便解离 出大量阳离子而呈现樱桃红色。 细胞核与细胞质不着色

二、材料、试剂与器械·实验材料洋葱绿豆芽胚轴胚根·试剂Ringer溶液、M-缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）1%Triton X-100、10%中性红溶液、0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛·器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、解剖盘、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面血、吸管（1根/人）、吸水纸

• 实验材料 绿豆芽 洋葱 • 试剂 Ringer溶液、 M－缓冲液、磷酸缓冲液（PBS）、 1%Triton X-100、 10%中性红溶液 、 0.2%考马斯亮蓝 R250、3%戊二醛 • 器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、 解剖盘、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、 吸管（1根/人）、吸水纸 二、材料、试剂与器械

三、实验步骤1植物活细胞内液泡系的染色和观察（1）豆苗培养实验前把绿豆培养在培养血内潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸长到1cm以上。（2）染色用刀片把绿豆幼苗根尖切一纵切面，放于载玻片上，滴一滴1/3000中性红染液，染色8-10min。（3）制片吸去染液，滴1滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察（4）镜检

（1）豆苗培养 实验前把绿豆培养在培养皿内潮湿的滤纸上，使其发芽， 胚根伸长到1cm以上。 （2）染色 用刀片把绿豆幼苗根尖切一纵切面，放于载玻片上，滴一 滴1/3000中性红染液，染色8-10min。 （3）制片 吸去染液，滴1滴Ringer液，盖上盖玻片，并用镊子轻轻 地下压盖玻片，使根尖压扁，利于观察。 （4）镜检 三、实验步骤 1 植物活细胞内液泡系的染色和观察

2洋葱细胞骨架的观察（1）撕取洋葱鳞叶内表皮1片，约1cm2，置于1.5mL离心管中（2）用磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡片刻。（3）吸去PBS，用1%TritonX-100处理20min，抽提细胞骨架以外的蛋白质，增加细胞膜的通透性。（4）吸去TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3minM-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。（5）用3%戊二醛固定15~20min（6）用PBS洗3次，每次3min。（7）考马斯亮蓝染色15min。（8）蒸馏水洗2次。（9）置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察

（1）撕取洋葱鳞叶内表皮1片，约1cm2，置于1.5mL离心管中。 （2）用磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡片刻。 （3）吸去PBS，用1% Triton X-100处理20min，抽提细胞骨 架以外的蛋白质，增加细胞膜的通透性。 （4）吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次3min。 M-缓冲液有稳定细胞骨架的作用。 （5）用3%戊二醛固定15～20 min。 （6）用PBS洗3次，每次3 min。 （7）考马斯亮蓝染色15 min。 （8）蒸馏水洗2次。 （9）置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。 2 洋葱细胞骨架的观察

五、实验结果1植物活细胞内液泡系的观察成熟区细胞，只有一个淡红色的巨大液泡，占据细胞的绝大部分，成熟区将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞壁处，液泡颜色更淡。伸长区伸长区，细胞已分化长大，体积增大，液泡增大，液泡的染色较浅，数目变少分生区生长点，细胞小，很多大小不等的染成玫瑰红色的圆形小泡，这是初生的幼小液泡根冠区

五、实验结果 生长点，细胞小，很多大小不等 的染成玫瑰红色的圆形小泡，这 是初生的幼小液泡 伸长区，细胞已分化长大，体积 增大，液泡增大，液泡的染色较 浅，数目变少 成熟区细胞，只有一个淡红色的 巨大液泡，占据细胞的绝大部分， 将细胞核挤到细胞一侧贴近细胞 壁处，液泡颜色更淡。 1 植物活细胞内液泡系的观察

2洋葱表皮细胞细胞骨架的观察洋葱表皮细胞内可见丝状、网状骨架结构，包括微管微丝都清晰可见

2 洋葱表皮细胞细胞骨架的观察 洋葱表皮细胞内可见丝状、网状骨架结构，包括微管、 微丝都清晰可见

业作1.描绘绿豆芽根尖细胞及液泡2．描绘及描述洋葱表皮细胞骨架的形态

作 业 1. 描绘绿豆芽根尖细胞及液泡。 2. 描绘及描述洋葱表皮细胞骨架的形态