厦门大学：《细胞与显微技术实验》课程教学资源（讲义）动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察

实验三动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察一.实验原理活体染色是指对活有机体的细胞或组织能着色但文无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。二.试剂与器械1.器材：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、签、解剖盘载玻片、盖玻片、表面血、吸管、牙吸水纸。2.试剂：1%詹纳斯绿B溶液

实验三 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察 一. 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种 染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生 命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器 官和生理状态的不同而发生变化。詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行 超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终 保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这 些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 二.试剂与器械 1.器材 :显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、 解剖盘．载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙 签、 吸水纸。 2.试剂：1%詹纳斯绿B溶液

Janus greenB中文名称：詹纳斯绿B英文名称：JanusgreenB别名：健那绿：双氮嗪绿。苏铁木精英文别名：JanusgreenDiazinegreen：DiazinegreenS化学式：C3oH3iNgCI定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地显示线粒体。詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。CH2CHclCH2CH3

Janus green B 中文名称：詹纳斯绿 B 英文名称：Janus green B 别名：健那绿；双氮嗪绿。 苏铁木精 英文别名: Janus green；Diazine green；Diazine green S 。 化学式：C3 0H3 1N6C l 定义：主要用于生物活体染色的一种碱性偶氮吖嗪染料。能穿过细胞膜，进入细胞特异地 显示线粒体。 詹纳斯绿 B 是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的 细 胞色 素 C 氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料 保持氧化状态（即 有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无 色状态。 必须指出的是，只有具有活性的细胞色素 C 氧化酶才能够把詹纳斯绿 B 氧化， 从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要 把生物材料置于 0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅 速

三．实验步骤（一）线粒体的超活染色1.取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液。。2.实验者用牙签宽头在自已口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，染色10一15min（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。3.大肠杆菌作为对照4.在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。（二）油镜的观察操作1.把镜筒向上提升约1?5cm，再把油镜转到工作位置

三．实验步骤 （一）线粒体的超活染色 1. 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1/5000詹 纳斯绿B染液。 。 2. 实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，染色10－l5min(注意不 可使染液干燥，必要时可再加滴染液)，盖上盖玻片，用吸水纸 吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。 3. 大肠杆菌作为对照 4. 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜或油镜进行观 察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝 绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 （二）油镜的观察操作 1. 把镜筒向上提升约1·5cm，再把油镜转到工作位置

2．在盖玻片上所要观察的位置滴一小滴香柏油或石蜡油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边动细调焦螺旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。3.观察完毕后，提升物镜约1cm，把油镜转离光轴，及时做清洁工作。油镜先用干的擦镜纸擦1一2次，把部分油去掉，再用清洁剂（70%乙醚+30%无水乙醇）滴湿的擦镜纸擦2次，最后用于擦镜纸擦1次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油也用同样方法处理。4.注意事项：应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功

2. 在盖玻片上所要观察的位置滴一小滴香柏油或石蜡 油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油 镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻 片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺 旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。 3. 观察完毕后，提升物镜约lcm，把油镜转离光轴，及时做清洁 工作。油镜先用干的擦镜纸擦1一2次，把部分油去掉，再用清 洁剂(70%乙醚+30%无水乙醇) 滴湿的擦镜纸擦2次，最 后用于擦镜纸擦1次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油 也用同样方法处理。 4.注意事项 :应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细 胞染色不能成功

五．实验结果可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短状的结构，即是线粒体。3348六．作业题1.简述使用油镜前后的注意事项。2.描绘描述线粒体的形态结构

五. 实验结果 可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或 短状的结构，即是线粒体。 六. 作业题 1.简述使用油镜前后的注意事项。 2. 描绘描述线粒体的形态结构

六．作业题1.简述使用油镜前后的注意事项。2.描绘描述线粒体的形态结构

六. 作业题 1.简述使用油镜前后的注意事项。 2. 描绘描述线粒体的形态结构