厦门大学：《细胞与显微技术实验》课程教学资源（讲义）免疫荧光技术和细胞骨架的染色与观察

免疫荧光技术和细胞骨架的染色与观察厦门大学生命科学学院

免疫荧光技术和细胞骨架的染色与观察 厦门大学生命科学学院

实验目的与要求1.掌握免疫荧光技术的基本原理及其应用：2.掌握荧光显微镜的成像基本原理及其应用

实验目的与要求 1. 掌握免疫荧光技术的基本原理及其应用； 2. 掌握荧光显微镜的成像基本原理及其应用

免疫荧光技术（Immunofluorescencetechnique）文称荧光抗体技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。该技术的主要优缺点主要优点：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又 称荧光抗体技术。它是在免疫学、生物化学和显微 镜技术的基础上建立起来的一项技术。 该技术的主要优缺点 主要优点：特异性强、敏感性高、速度快。 主要缺点：非特异性染色问题尚未完全解 决，结果判定的客观性不足， 技术程序也还比较复杂

抗原的概念抗原是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应的免疫应答产物即抗体和致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结合的物质，也称为免疫原。前一种性能称为免疫原性或抗原性，后一种性2.百能称为反应原性或免疫反应性

1. 抗原是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异 性免疫应答，并能与相应的免疫应答产物即抗 体和致敏淋巴细胞在体内或体外发生特异性结 合的物质，也称为免疫原。 2. 前一种性能称为免疫原性或抗原性，后一种性 能称为反应原性或免疫反应性。 抗原的概念

抗体及其1.环境中的大部分生物（包括病原生物）产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染和其它的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主的体液免疫应答。同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含2.有特异性抗体的血清，称为抗血清

1. 环境中的大部分生物（包括病原生物）及其 产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系 统而言是外源抗原，这些抗原能通过侵染和 其它的途径刺激免疫系统，产生以抗体为主 的体液免疫应答。 2. 同样用抗原人工免疫实验动物，可以获得含 有特异性抗体的血清，称为抗血清。 抗体

实验的基本原理抗原抗体反应：抗体能特异性地识别相应的抗原并与之结合。这种结合在体外也能发生，这种特性就是许多免疫检测方法的基础荧光技术与免疫技术的结合可用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测

实验的基本原理 • 抗原抗体反应：抗体能特异性地识别相应的抗原， 并与之结合。这种结合在体外也能发生，这种特 性就是许多免疫检测方法的基础。 • 荧光技术与免疫技术的结合可用于对样品结构 或其组分进行定性、定位、定量观察检测

根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检香细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。·直接法，间接法·补体法其他

根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体 标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体 （或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应 抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体 复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本， 荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色 或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从 而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技 术测定含量。 • 直接法 • 间接法 • 补体法 • 其他

荧光标记抗体直接法荧光标记抗体抗lg抗体间接法洗涤荧光标记补体抗体抗C3抗体补体法洗洗涤涤大免疫荧光技术Immunology

直接法荧光标记抗体将荧光标记的特异性抗TH体（抗原）直接加在抗>F抗原原（抗体）上，经一定的温度和时间染色，水洗一干燥-封片一镜检操作简便、特异性高、非特异性染色少敏感性低

直接法 • 将荧光标记的特异性抗 体（抗原）直接加在抗 原（抗体）上，经一定 的温度和时间染色，水 洗-干燥-封片-镜检 • 操作简便、特异性高、 非特异性染色少 • 敏感性低 抗原 标记抗体 荧光

间接法先用已知未标记的特荧光异抗体(一抗)与抗未标标记记扰抗体原反应，再用标记的未知体抗原抗体（二抗）与其反√应，形成抗原-抗体一抗体复合物，水洗一干燥一封镜一镜检

间接法 • 先用已知未标记的特 异抗体（一抗）与抗 原反应，再用标记的 抗体（二抗）与其反 应，形成抗原-抗体- 抗体复合物，水洗- 干燥-封镜-镜检 未知 抗原 未标 记抗 体 标记 抗体 荧光