《遗传与分子生物学实验》课程教学资源（讲义）细菌转导

实验四纟细菌转导

实验四 细菌转导

实验目的通过大肠杆菌噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因学习掌握局限性转导的原理，掌握转导实验的基本方法

实验目的  通过大肠杆菌噬 菌体专一性转导 半乳糖发酵基因 学习掌握局限性 转导的原理，掌 握转导实验的基 本方法

噬菌体介绍噬菌体是指细菌病毒生活周期：吸附、侵入、GENTRALHEADUBE复制合成、装配、释放HOSTCELL·烈性噬菌体TAILTAIL如T4PLATE·温和噬菌体如入、Mu-1、P1和P2等

噬菌体介绍 噬菌体是指细菌病毒 生活周期：吸附、侵入、 复制合成、装配、释放 •烈性噬菌体 如T4 •温和噬菌体 如、Mu-1、P1和P2等

噬菌体结构Head (contains DNA)CollarTail coreTail sheathBaseplateTail fiber(b)

噬菌体结构

1.HeadassemblyandDNApackaging噬菌体组装Initial head assembly2.TailassemblyDNABaseplateassemblyDNApackagingCoreaddedtobaseplateSheathandcollaraddedTailaddedtohead3,TailfibersynthesisandassemblyKTail fibersadded一公MatureT,phage

噬菌体组装

入噬菌体载体CentralgeneclusterLambda phageLambda DNAmoleculegene clusteroentralCentral region removed byrestriction enzymedigestionamodaarmsnsotonandiiaationoforeionoNanvitropackagingRecombinantviralparticleabletoinfectbacterial hostcellandreplicatetoforimplaquescarrying cloned foreigninsert

λ噬菌体载体

Bacteriumin35smediumBacterium in 32pmediumPhage (unlabeled)证明遗传物质是Progeny phage withProgenyphage35s-labeledproteinDNA而非Labeled phagewith unlabeledand unlabeledDNAprogenyreleasedproteinand52p-labeledDNA蛋白质的Hershey-LabeledproteinUnlabeledInfects unlabeledstays outsideprotein staysunlabeledbacteriaoutside,labeledChase实验DNAenters cellDNAenters cellProgeny phageProgeny phagevirtuallyunlabeledstronglylabeled(lessthan1%of(morethan30%original35Sof original 32precovered)recovered)

证明遗传 物质是 DNA而非 蛋白质的 Hershey￾Chase实验

溶源菌的形成入噬菌体整合进大肠杆菌染色体中的固定位点上，这个位点在gal(半乳糖代谢基因)和bio(生物素合成基因）之间，这位点称为BOB，它与入的附着位点POP有相同的核心序列区，由15bp组成，它们通过同源单交换发生整合，形成溶源菌

溶源菌的形成 噬菌体整合进大肠杆菌 染色体中的固定位点上， 这个位点在gal(半乳糖代 谢基因)和bio(生物素合 成基因)之间，这位点称 为BOB’，它与的附着 位点POP’有相同的核心 序列区，由15bp组成， 它们通过同源单交换发 生整合，形成溶源菌

实验原理转导定义：以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程，普遍性转导P1和P2局限性转导 ^dg ^db

实验原理  转导定义： 以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体） 的遗传物质传递给另一个细胞（受体） 的过程。  普遍性转导 P1和P2  局限性转导 λ λdg λdb

实验材料菌株：E.colik12(2)gal+k12Sgal用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml)Tip枪头(1ml/200ul/20ul)培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/EMB试剂：氯仿、磷酸buffer

实验材料  菌株：E.coli k12(λ)gal+ k12Sgal-  用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml) Tip枪头(1ml/200ul/20ul)  培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/EMB)  试剂：氯仿、磷酸buffer