《食品安全学》课程教学资源（实验指导）实验八 叔丁基对羟基茴香醚（BHA）的测定

实验八叔丁基对羟基茴香醚(BHA)的测定 一、实验目的 1.了解测定BHA的原理及方法： 2.熟练掌握分光光度计的用法。 二、实验原理 样品经石油醚萃取后，根据BHA在石油醚相和含水乙醇相中分配系数的不同，使BHA转入72%乙 醇相中，再与2,6一二氯醌氯亚胺一硼砂溶液的显色剂作用，生成一种特有的蓝色化合物，颜色的深 浅与BHA的量成正比，可比色测定。 三、实验试剂与仪器 1.0.01%2,6一二氯醌氯亚胺溶液：称取0.01g2,6一二氯醌氯亚胺溶于无水乙醇中，并稀释至 100mL。临用时配制，避光并贮于冰箱中； 2.2%硼砂溶液； 3.72%乙醇溶液； 4.石油醚：沸程30-60℃； 5.无水乙醇： 6.BHA标准溶液：准确称取100 ngBHA,用无水乙醇溶解后，移入100mL量瓶中，并用无水乙醇稀 释至刻度，混匀。此液每毫升含1mgBHA。使用时将此标准液稀释成每毫升含1μg和5μg的BHA的标 准工作液； 7.分光光度计。 四、操作步骤 1.标准曲线的绘制：分别吸取每mL含1μgBHA的标准溶液0.0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL,另吸取 每mL含5μg的标准溶液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL,分别置于比色管中，然后加入72%乙醇溶液至总 体积为8mL,再分别加入0.1%2,6一二氯醌氯亚胺溶液1mL,充分混匀，再加入1mL硼砂缓冲溶液， 摇匀后，静置20min,于分光光度计620nm波长处测定光密度，绘制标准曲线： 2.样品分析：准确称取磨碎样品10.0g(视样品含量而定)，置于150mL带塞的三角烧瓶中，加入 50mL石油醚，于振荡器上振荡20min,静置。吸取上层清液25mL,置于分液漏斗中，以72%乙醇溶 液15、10、10、10mL分次抽提、收集乙醇溶液层于50mL容量瓶中，并用72%乙醇溶液稀释至刻度， 混匀。吸取样品乙醇溶液4mL,加入72%乙醇溶液至总体积为8mL,摇匀，加入0.01%2,6一二氯醌氯 亚胺溶液1L,以下操作同标准曲线的绘制。根据测得的光密度，从标准曲线查得相应的BHA的含 量。 五、计算 BHA (mg/kg)=C/WX 1000 式中C一相当于BHA的标准量，mg: W一测定时样品溶液相当于样品的重量，g

实验八 叔丁基对羟基茴香醚(BHA)的测定 一、实验目的 1.了解测定BHA的原理及方法； 2.熟练掌握分光光度计的用法。 二、实验原理 样品经石油醚萃取后，根据BHA在石油醚相和含水乙醇相中分配系数的不同，使BHA转入72%乙 醇相中，再与2,6－二氯醌氯亚胺－硼砂溶液的显色剂作用，生成一种特有的蓝色化合物，颜色的深 浅与BHA的量成正比，可比色测定。 三、实验试剂与仪器 1.0.01%2,6－二氯醌氯亚胺溶液：称取0.01g2,6－二氯醌氯亚胺溶于无水乙醇中，并稀释至 100mL。临用时配制，避光并贮于冰箱中； 2.2%硼砂溶液； 3.72%乙醇溶液； 4.石油醚：沸程30-60℃； 5.无水乙醇； 6.BHA标准溶液：准确称取100mgBHA，用无水乙醇溶解后，移入100mL量瓶中，并用无水乙醇稀 释至刻度，混匀。此液每毫升含1mgBHA。使用时将此标准液稀释成每毫升含1µg和5µg的BHA的标 准工作液； 7.分光光度计。 四、操作步骤 1.标准曲线的绘制：分别吸取每mL含1µgBHA的标准溶液0.0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0mL，另吸取 每mL含5µg的标准溶液3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，分别置于比色管中，然后加入72%乙醇溶液至总 体积为8mL，再分别加入0.1%2,6－二氯醌氯亚胺溶液1mL，充分混匀，再加入1mL硼砂缓冲溶液， 摇匀后，静置20min，于分光光度计620nm波长处测定光密度，绘制标准曲线； 2.样品分析：准确称取磨碎样品10.0g（视样品含量而定），置于150mL带塞的三角烧瓶中，加入 50mL石油醚，于振荡器上振荡20min，静置。吸取上层清液25mL，置于分液漏斗中，以72%乙醇溶 液15、10、10、10mL分次抽提、收集乙醇溶液层于50mL容量瓶中，并用72%乙醇溶液稀释至刻度， 混匀。吸取样品乙醇溶液4mL，加入72%乙醇溶液至总体积为8mL，摇匀，加入0.01%2,6－二氯醌氯 亚胺溶液1mL，以下操作同标准曲线的绘制。根据测得的光密度，从标准曲线查得相应的BHA的含 量。 五、计算 BHA（mg/kg）＝C/W×1000 式中 C－相当于BHA的标准量，mg； W－测定时样品溶液相当于样品的重量，g