食品科学与工程实验教学课件：高效液相色谱法（PPT讲稿）

FABIANNE高数液相色谱法HOFABIANNE

色谱法概述·色谱法是一种分离技术·色谱法原理是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使各组份在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。两相中有一相是固定的，叫作固定相，有一相是流动的，成为流动相

一、色谱法概述 • 色谱法是一种分离技术 • 色谱法原理 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解、 分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相 对运动时，使各组份在两相中反复多次受到上述 各作用力而达到相互分离。 两相中有一相是固定 的，叫作固定相，有一相是流动的，成为流动相

高效液相色谱是以液体为流动相的色谱方法按照固定相不同分为：液液分配色谱：液固吸附色谱：离子交换色谱：尺寸排阻色谱（凝胶渗透色谱）此外，还有亲和色谱、平板色谱（薄层色谱）等

高效液相色谱是以液体为流动相的色谱方法。 按照固定相不同分为：液液分配色谱；液固吸附色 谱；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。 此外，还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等

HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只占有机物总数的20%；HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行

HPLC与GC的比较 分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定 化合物，而这些物质只占有机物总数的20%；HPLC可以分析 高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物 总数的80%。 流动相的选择：GC采用的流动相中为有限的几种“惰性” 气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC采用的流动相为 液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作 用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争， 即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行

>高效液相色谱与气相色谱比较气相色谱高效液相色谱只能分析挥发性物质，只能几乎可以分析各种物质分析20%的化合物不能分析热不稳定物质可以分析热不稳定物质用毛细管色谱可得到很高的色谱柱不能很长，柱效不会很嵩柱效有很灵敏的检测器如ECD和较灵敏的通用检测器（FID和没有较高灵敏的通用检测器TCD)流动相为气体，无毒，易于流动相有毒，费用较高处理运行和操作容易运行和操作比GC难一些仪器制造难度较小仪器制造难度大

➢ 高效液相色谱与气相色谱比较 气相色谱 高效液相色谱 只能分析挥发性物质，只能 分析20%的化合物 几乎可以分析各种物质 不能分析热不稳定物质 可以分析热不稳定物质 用毛细管色谱可得到很高的 柱效 色谱柱不能很长，柱效不会 很高 有很灵敏的检测器如ECD和 较灵敏的通用检测器(FID和 TCD) 没有较高灵敏的通用检测器 流动相为气体，无毒，易于 处理 流动相有毒，费用较高 运行和操作容易 运行和操作比GC难一些 仪器制造难度较小 仪器制造难度大

液相色谱仪进样器产高压泵中分离柱结构流程贮液瓶信号检测器记录仪废液

液相色谱仪 结构流程

hypodemic注射器syringeprecolumn预柱injector进样器pump高压泵接头mixingchamber混合室fittings色谱柱column溶剂检测器solvents数据系统MdetectorHPLC仪器结构图detasystem

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>高效液相色谱分析过程分析前，选择适当的色谱柱和流动相。开泵，冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分浓度转变成电信号，经过放大输入计算机，经过工作站数据处理，就得到色谱图。色谱图是定性定量和评价柱效高低的依据

➢高效液相色谱分析过程 分析前，选择适当的色谱柱和流动相。开泵， 冲洗柱子，待柱子达到平衡而且基线平直后，用 微量注射器把样品注入进样口，流动相把试样带 入色谱柱进行分离，分离后的组分依次流入检测 器的流通池，最后和洗脱液一起排入流出物收集 器。当有样品组分流过流通池时，检测器把组分 浓度转变成电信号，经过放大输入计算机，经过 工作站数据处理，就得到色谱图。色谱图是定性、 定量和评价柱效高低的依据

二、主要部件(1)高压输液泵>主要部件之一，压力：150×105～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10um)，液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压高速是高效液相色谱的特点之一应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特性。流动相出口密封垫柱塞单向阁oy偏心轮流动相进口

二、主要部件 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性

(2)进样装置注射器注射器流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通定量管定量管阀进样装置，柱泵废液废液进样结构如图所示：准备液相色谱高压进样阀试样试样入口人口试样试样出口出口样品环h流动相流动相入口入口色谱柱色谱柱入口入口b谁备状态进样状态a

(2) 进样装置 流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置， 结构如图所示：