重庆医科大学：《临床生物化学》课程教学资源（教案讲义）生化技术教学大纲

临床生物化学和生物化学检验教学大纲-一生化技术部分（供检验医学专业五年制本科学生使用）医学检验系临床生化教研室二〇O三年三月

临床生物化学和生物化学检验 教学大纲 ——生化技术部分 （供检验医学专业五年制本科学生使用） 医学检验系临床生化教研室 二○○三年三月

前言临床生物化学和生物化学检验是在人体正常生物化学代谢基础上，研究疾病状态下，生物化学病理性变化的基础理论和相关代谢物的质与量的改变，从而为疾病的临床实验诊断、治疗监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等方面提供信息和决策依据的一门学科。其主要任务是利用多个学科的理论与技术，探讨疾病的发病机制，研究其病理过程中出现的特异性化学标志物或体内特定成分的改变。临床生物化学和生物化学检验按其内容可分为两部分：一部分以理论为主。着重疾病时的化学组分及代谢变化，以阐明疾病的生化本质，可称之为临床生物化学或病理生化；另一部分以技术和方法为主，主要运用生化检验技术与方法，为临床诊断与治疗提供实验依据，称之为生物化学检验技术。由于临床生物化学和生物化学检验是检验专业的一门重要的主干专业课，根据检验系本科五年的教学计划，共开设两门必修课程。一门以生物化学技术为主，主要介绍基本的生物化学分析技术，为生物化学检验的临床应用奠定技术基础，共54学时；一门以临床生物化学的基本理论和生物化学检验的临床应用为主，包括临床生物化学和生物化学检验两个部分，理论讲授72学时，实验54学时，共126学时。另开设两门选修课，一门为治疗药物监测，介绍治疗药物检测药动学基础与临床应用，共60学时；一门为临床生化专题，主要通过，明确临床生

2 前 言 临床生物化学和生物化学检验是在人体正常生物化学代谢基 础上，研究疾病状态下，生物化学病理性变化的基础理论和相关代 谢物的质与量的改变，从而为疾病的临床实验诊断、治疗监测、药 物疗效、预后判断和疾病预防等方面提供信息和决策依据的一门学 科。其主要任务是利用多个学科的理论与技术，探讨疾病的发病机 制，研究其病理过程中出现的特异性化学标志物或体内特定成分的 改变。 临床生物化学和生物化学检验按其内容可分为两部分：一部 分以理论为主。着重疾病时的化学组分及代谢变化，以阐明疾病的 生化本质，可称之为临床生物化学或病理生化；另一部分以技术和 方法为主，主要运用生化检验技术与方法，为临床诊断与治疗提供 实验依据，称之为生物化学检验技术。由于临床生物化学和生物化 学检验是检验专业的一门重要的主干专业课，根据检验系本科五年 的教学计划，共开设两门必修课程。一门以生物化学技术为主，主 要介绍基本的生物化学分析技术，为生物化学检验的临床应用奠定 技术基础，共 54 学时；一门以临床生物化学的基本理论和生物化 学检验的临床应用为主，包括临床生物化学和生物化学检验两个部 分，理论讲授 72 学时，实验 54 学时，共 126 学时。另开设两门选 修课，一门为治疗药物监测，介绍治疗药物检测药动学基础与临床 应用，共 60 学时；一门为临床生化专题，主要通过，明确临床生

物化学实验方法的选择与评价，共54学时。学生应当通过课堂听课，动手和自学自修，掌握本课程的主要内容，在理论知识、实验技能及临床应用等方面打下一个较好的基础。本教学大纲是针对生化技术部分修订而成。参考书目《临床生物化学和生物化学检验》（卫生部规划教材）第1~3版(医学检验专业本科教材)。2．《临床生物化学和生物化学检验实验指导》（卫生部规划教材）第1~2版（医学检验专业本科教材）。3．《生物化学检验》（卫生部规划教材）第1~2版（医学检验专业专科教材)

3 物化学实验方法的选择与评价，共 54 学时。 学生应当通过课堂听课，动手和自学自修，掌握本课程的主 要内容，在理论知识、实验技能及临床应用等方面打下一个较好的 基础。 本教学大纲是针对生化技术部分修订而成。 参考书目 1. 《临床生物化学和生物化学检验》（卫生部规划教材）第 1~3 版 （医学检验专业本科教材）。 2. 《临床生物化学和生物化学检验实验指导》（卫生部规划教材） 第 1~2 版（医学检验专业本科教材）。 3. 《生物化学检验》（卫生部规划教材）第 1~2 版（医学检验专业 专科教材）

目录第一专题血清蛋白质含量分析(6)第二专题电泳技术.(6)第三专题层析技术.(6)第四专题层析技术录像.(7)第五专题亚细胞结构的分离..(7)第六专题蛋白质的分离纯化.(8)第七专题酶的分离纯化...（8)第八专题酶活力测定及酶动力学（8)第九专题实验操作基础...(9)...(9)实验一双缩脲法测定血浆蛋白质.实验二紫外分光光度法测定血清蛋白质....10)考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质(10).. (11)实验四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.(11)实验五ACP系列实验(一)实验六ACP系列实验（二).(11)实验七ACP系列实验(三)..(12)

4 目 录 第一专题 血清蛋白质含量分析.（6） 第二专题 电泳技术.（6） 第三专题 层析技术.（6） 第四专题 层析技术录像.（7） 第五专题 亚细胞结构的分离.（7） 第六专题 蛋白质的分离纯化.（8） 第七专题 酶的分离纯化.（8） 第八专题 酶活力测定及酶动力学.（8） 第九专题 实验操作基础.（9） 实验一 双缩脲法测定血浆蛋白质.（9） 实验二 紫外分光光度法测定血清蛋白质 考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质.（10） 实验三 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质.（10） 实验四 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.（11） 实验五 ACP 系列实验（一）.（11） 实验六 ACP 系列实验（二）.（11） 实验七 ACP 系列实验（三）.（12）

教学时数分配表章节教学内容学时数3第一一专题血清蛋白质含量分析第二专题3电泳技术第三专题层析技术33第四专题层析技术录像3第五专题亚细胞结构的分离第六专题蛋白质的分离纯化3第七专题3酶的分离纯化3第八专题酶活力测定及酶动力学3第九专题实验操作基础实验一3双缩脲法测定血浆蛋白质3实验二紫外分光光度法测定血清蛋白质考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质33实验四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质5实验五ACP系列实验（一）实验六5ACP系列实验（(二)实验七5ACP系列实验(三)合计545

5 教学时数分配表 章节 教学内容 学时数 第一专题 血清蛋白质含量分析 3 第二专题 电泳技术 3 第三专题 层析技术 3 第四专题 层析技术录像 3 第五专题 亚细胞结构的分离 3 第六专题 蛋白质的分离纯化 3 第七专题 酶的分离纯化 3 第八专题 酶活力测定及酶动力学 3 第九专题 实验操作基础 3 实验一 双缩脲法测定血浆蛋白质 3 实验二 紫外分光光度法测定血清蛋白质 考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质 3 实验三 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 3 实验四 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 3 实验五 ACP 系列实验（一） 5 实验六 ACP 系列实验（二） 5 实验七 ACP 系列实验（三） 5 合 计 54

第一专题血清蛋白质含量分析教学目的与要求.掌握各血清蛋白质测定方法的原理，了解蛋白质定量技术的进展，并比较各方法的优缺点二。教学重点、难点双缩脲法、酚试剂法、紫外分光光度法、染料结合法、比浊法测定血清总蛋白的原理及方法学评价三。教学方法课堂讲授四。 思考题1.血清蛋白质定量的基础是什么？2.简述双缩脲法测定血清蛋白质的原理及评价。第二专题电泳技术教学目的与要求一.掌握电泳技术的基本原理和影响因素。了解电泳技术在医学上的应用及发展概况。二，教学重点、难点熟悉影响电泳的因素，了解CAME（醋酸纤维薄膜电泳）、PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）的原理与方法，以及SDS-PAGE、IEFE、双向电泳等技术的应用。三。教学方法课堂讲授。四。思考题1．影响电泳的因素有哪些?2.何谓电渗作用，其应用价值如何？3.SDS-PAGE测定蛋白质近似分子量的基本原理如何？4．影响电泳迁移率的因素有哪些？第三专题层析技术一。教学目的与要求

6 第一专题 血清蛋白质含量分析 一．教学目的与要求 掌握各血清蛋白质测定方法的原理，了解蛋白质定量技术的进展，并比较各 方法的优缺点。 二．教学重点、难点 双缩脲法、酚试剂法、紫外分光光度法、染料结合法、比浊法测定血清总蛋 白的原理及方法学评价。 三．教学方法 课堂讲授 四．思考题 1.血清蛋白质定量的基础是什么？ 2.简述双缩脲法测定血清蛋白质的原理及评价。 第二专题 电泳技术 一．教学目的与要求 掌握电泳技术的基本原理和影响因素。了解电泳技术在医学上的应用及发展 概况。 二．教学重点、难点 熟悉影响电泳的因素，了解 CAME（醋酸纤维薄膜电泳）、PAGE（聚丙烯酰 胺凝胶电泳）的原理与方法，以及 SDS-PAGE、IEFE、双向电泳等技术的应 用。 三．教学方法 课堂讲授。 四．思考题 1．影响电泳的因素有哪些？ 2．何谓电渗作用，其应用价值如何？ 3．SDS-PAGE 测定蛋白质近似分子量的基本原理如何？ 4．影响电泳迁移率的因素有哪些？ 第三专题 层析技术 一．教学目的与要求

熟悉层析技术的原理及类型。了解层析技术在蛋白质分离提纯中的作用。二。教学重点、难点掌握层析技术的分类、凝胶层析的原理、技术及应用。了解离子交换层析、亲和层析基本原理应用。三。教学方法课堂讲授。四．思考题1．层析技术有哪些特点？2.分配层析的原理是什么？3．凝胶层析测定蛋白质分子量的原理是什么？第四专题层析技术录像一。教学目的与要求熟悉并掌握层析技术的原理及操作方法。二。教学重点、难点了解凝胶层析、薄层层析的原理及实验方法。三。教学方法观看教学录像。四。 思考题1．凝胶层析的实验技术包括哪些步骤？2．薄层层析的原理是什么？第五专题亚细胞结构的分离→、教学目的与要求了解离心技术在生物化学组分分离中的应用；熟悉离心分离的原理及基本参数的概念与计算；掌握常用的离心分离方法。二、教学重点难点：离心分离的原理及基本参数的计算，各种离心分离方法的特点与适用性三、教学方法：课堂讲授。四、思考题:

7 熟悉层析技术的原理及类型。了解层析技术在蛋白质分离提纯中的作用。 二．教学重点、难点 掌握层析技术的分类、凝胶层析的原理、技术及应用。了解离子交换层析、 亲和层析基本原理应用。 三．教学方法 课堂讲授。 四．思考题 1．层析技术有哪些特点？ 2．分配层析的原理是什么？ 3．凝胶层析测定蛋白质分子量的原理是什么？ 第四专题 层析技术录像 一．教学目的与要求 熟悉并掌握层析技术的原理及操作方法。 二．教学重点、难点 了解凝胶层析、薄层层析的原理及实验方法。 三．教学方法 观看教学录像。 四．思考题 1．凝胶层析的实验技术包括哪些步骤？ 2．薄层层析的原理是什么？ 第五专题 亚细胞结构的分离 一、教学目的与要求： 了解离心技术在生物化学组分分离中的应用； 熟悉离心分离的原理及基本参数的概念与计算； 掌握常用的离心分离方法。 二、教学重点难点： 离心分离的原理及基本参数的计算，各种离心分离方法的特点与适用性。 三、教学方法： 课堂讲授。 四、思考题：

1.离心分离的原理。2.离心技术中基本参数的概念与计算3.各种离心分离方法的特点与各自适用性。第六专题蛋白质的分离纯化、教学目的与要求：熟悉蛋白质分离纯化的各种技术方法。掌握蛋白质分离纯化的基本过程与策略了解蛋白质分离纯化的目的意义。二、教学重点难点：蛋白质分离纯化的策略。三、教学方法：课堂讲授，四、思考题1.蛋白质分离纯化的基本过程与策略。2．有哪些技术方法可用于蛋白质的分离纯化？第七专题酶的分离纯化一、教学目的与要求：熟悉酶的特性、酶的命名及分类。掌握酶的分离纯化技术。了解酶的史程。二、教学重点难点：制酶要点、酶活性的保持、酶纯度的鉴定。三、教学方法：课堂讲授。四、思考题：1．酶分离纯化的技术要点。如何在酶的分离纯化过程中保持酶的活性？3．如何对分离纯化的酶进行纯度与活性的鉴定？第八专题酶活力测定及酶动力学一、教学目的与要求：

8 1. 离心分离的原理。 2. 离心技术中基本参数的概念与计算。 3. 各种离心分离方法的特点与各自适用性。 第六专题 蛋白质的分离纯化 一、教学目的与要求： 熟悉蛋白质分离纯化的各种技术方法。 掌握蛋白质分离纯化的基本过程与策略。 了解蛋白质分离纯化的目的意义。 二、教学重点难点： 蛋白质分离纯化的策略。 三、教学方法： 课堂讲授。 四、思考题： 1. 蛋白质分离纯化的基本过程与策略。 2. 有哪些技术方法可用于蛋白质的分离纯化？ 第七专题 酶的分离纯化 一、教学目的与要求： 熟悉酶的特性、酶的命名及分类。 掌握酶的分离纯化技术。 了解酶的史程。 二、教学重点难点： 制酶要点、酶活性的保持、酶纯度的鉴定。 三、教学方法： 课堂讲授。 四、思考题： 1. 酶分离纯化的技术要点。 2. 如何在酶的分离纯化过程中保持酶的活性？ 3. 如何对分离纯化的酶进行纯度与活性的鉴定？ 第八专题 酶活力测定及酶动力学 一、教学目的与要求：

熟悉酶活力测定的基本知识。掌握酶活力测定的影响因素、酶的基本动力学参数。了解酶的可逆抑制作用动力学。二、教学重点难点：影响酶活力测定的技术因素，酶的基本动力学，酶的可逆抑制作用动力学。三、教学方法：课堂讲授。四、思考题:1．如何设定酶活力测定的对照及酶促反应条件？2.酶活力测定方法与活性计算。3．影响酶活力测定的技术因素有哪些?4．酶的基本动力学参数及其应用。第九专题实验操作基础一、教学目的与要求：熟悉蛋白质定量、电泳、层析、离心与酶活力测定的实验操作基础。掌握ACP系列实验的内在联系及其实验理论与操作基础。了解生化技术实验的设计与安排。二、教学重点难点：ACP系列实验的实验理论与操作基础。三、教学方法：课堂讲授。四、思考题：1．各种生化分析技术的实验操作要点。2．ACP系列实验是如何设计的？其内在联系与实验理论基础是什么？实验一双缩脲法测定血浆蛋白质一。教学目的与要求掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理、操作方法及方法学评价。二。教学重点、难点掌握比色法测定的操作方法、步骤。了解双缩脲法的影响因素。三。教学方法

9 熟悉酶活力测定的基本知识。 掌握酶活力测定的影响因素、酶的基本动力学参数。 了解酶的可逆抑制作用动力学。 二、教学重点难点： 影响酶活力测定的技术因素，酶的基本动力学，酶的可逆抑制作用动力 学。 三、教学方法： 课堂讲授。 四、思考题： 1. 如何设定酶活力测定的对照及酶促反应条件？ 2. 酶活力测定方法与活性计算。 3. 影响酶活力测定的技术因素有哪些？ 4. 酶的基本动力学参数及其应用。 第九专题 实验操作基础 一、教学目的与要求： 熟悉蛋白质定量、电泳、层析、离心与酶活力测定的实验操作基础。 掌握 ACP 系列实验的内在联系及其实验理论与操作基础。 了解生化技术实验的设计与安排。 二、教学重点难点： ACP 系列实验的实验理论与操作基础。 三、教学方法： 课堂讲授。 四、思考题： 1. 各种生化分析技术的实验操作要点。 2. ACP 系列实验是如何设计的？其内在联系与实验理论基础是什么？ 实验一 双缩脲法测定血浆蛋白质 一．教学目的与要求 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理、操作方法及方法学评价。 二．教学重点、难点 掌握比色法测定的操作方法、步骤。了解双缩脲法的影响因素。 三．教学方法

实验操作。四。思考题1.双缩脲法测定血清蛋白的原理是什么？2.哪些因素会干扰双缩脲法测定血清蛋白的呈色反应？实验二紫外分光光度法测定血清蛋白质考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质教学目的与要求掌握紫外分光光度法、考马斯亮兰结合法测定血清蛋白的原理、操作方法及其方法学评价。二．教学重点、难点掌握考马斯亮兰结合法及紫外分光光度法测定血清蛋白的操作。了解影响测定结果的因素。三。教学方法实验操作。四。思考题1．蛋白质紫外吸收的物质基础是什么？2．紫外测定为什么要使用石英比色杯？3．染料结合法的优缺点是什么？实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质一。教学目的与要求掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理、操作方法。二.教学重点、难点掌握醋酸纤维薄膜电泳的准备、电泳操作、染色及定量的整个操作方法。了解其结果的计算方法和操作过程中应注意的事项。三．教学方法实验操作。四．思考题1．醋酸纤维薄膜电泳后条带分离不整齐的原因有哪些？2.醋酸纤维薄膜电泳的方法学评价如何？10

10 实验操作。 四．思考题 1．双缩脲法测定血清蛋白的原理是什么？ 2．哪些因素会干扰双缩脲法测定血清蛋白的呈色反应？ 实验二 紫外分光光度法测定血清蛋白质 考马斯亮兰结合法测定血清蛋白质 一．教学目的与要求 掌握紫外分光光度法、考马斯亮兰结合法测定血清蛋白的原理、操作方法及 其方法学评价。 二．教学重点、难点 掌握考马斯亮兰结合法及紫外分光光度法测定血清蛋白的操作。 了解影响测定结果的因素。 三．教学方法 实验操作。 四．思考题 1．蛋白质紫外吸收的物质基础是什么？ 2．紫外测定为什么要使用石英比色杯？ 3．染料结合法的优缺点是什么？ 实验三 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 一．教学目的与要求 掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理、操作方法。 二．教学重点、难点 掌握醋酸纤维薄膜电泳的准备、电泳操作、染色及定量的整个操作方法。 了解其结果的计算方法和操作过程中应注意的事项。 三．教学方法 实验操作。 四．思考题 1．醋酸纤维薄膜电泳后条带分离不整齐的原因有哪些？ 2．醋酸纤维薄膜电泳的方法学评价如何？