《医学免疫学》课程教学资源（实验指导）免疫标记技术——酶联免疫吸附试验（ELISA）

酶联免疫吸附试验(ELISA)

酶联免疫吸附试验（ELISA）

免疫标记技术用荧光素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原抗体反应，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。类型：免疫荧光技术R免疫酶技术放射免疫技术

免疫标记技术 类型：免疫荧光技术 免疫酶技术 放射免疫技术 用荧光素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原 抗体反应，是目前应用最广泛的免疫学检测技术

(EIA)免疫酶技术用酶标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色判定结果。常用的酶：辣根过氧化物酶（HRP）。常用方法：酶联免疫吸附试验测定可溶性抗原或抗体酶免疫组化法测定组织中或细胞表面的抗原

免疫酶技术（EIA） 常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP） 常用方法： 酶联免疫吸附试验—测定可溶性抗原或抗体 酶免疫组化法——测定组织中或细胞表面的抗原 用酶标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。将抗原抗体反 应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物 后显色判定结果

酶联免疫吸附试验ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay,1971年由瑞典学者Engrall和Perlmann，荷兰学者weeman和Schuurs报道，开创了运用酶标记免疫技术进行液体标本中微量物质测定的实验方法

1971年由瑞典学者Engrall和Perlmann, 荷兰学者 weeman和Schuurs报道，开创了运用酶标记免疫技术进 行液体标本中微量物质测定的实验方法。 酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）

ELISA基本的实验过程：）包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化。WDIWDIS抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合酶标板物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定。酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物酶标仪使发生酶促反应而显色

ELISA基本的实验过程： 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固 相载体表面，使抗原或抗体固相化。 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合 物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而 被结合固定。 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物， 使发生酶促反应而显色。 酶标仪 酶标板

ELISA基本的实验过程：+washwashwashAntibodyAddenzymeAdd substratecoatedwellconjugatedandmeasurecolorsecondaryantibody

ELISA基本的实验过程：

ELISA的基本类型双抗体夹心法间接法（测抗原）（测抗体）

双抗体夹心法 （测抗原） 间接法 （测抗体） ELISA的基本类型

血清稀释度1.包被抗原抗原22.洗涤483.加待检抗体16抗体324.洗涤641285.加酶标抗体酶标抗体2565126.洗涤10247.加底物显色阳性对照底物阴性对照8.观察结果酶联免疫吸附试验（ELISA，间接法）Immunology

一、目的掌握酶联免疫吸附实验的原理熟悉其操作步骤，利用ELISA双抗体夹心法测定乙(HBsAg)肝病毒表面抗原了解乙肝病毒抗原抗体检测的临床意义。+

一、目的  掌握酶联免疫吸附实验的原理。  熟悉其操作步骤，利用ELISA双抗体夹心法测定乙 肝病毒表面抗原（HBsAg）  了解乙肝病毒抗原抗体检测的临床意义

二、原理采用双抗体夹心法检测HBsAg。采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应

二、原理 采用双抗体夹心法检测HBsAg。 采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同 时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本存在HBsAg时， 该HBsAg与包被抗- HBs结合并与抗-HBs-HRP结合 形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入 TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应