《分子生物学》课程教学资源（PPT课件）07 PCR技术

PCR

一PCR诊断技术原理PCR诊断主要通过引物介导特异性扩增目的基大以检测内源性或外源性目的基因的存在与否，进而对疾病的预防、诊断、和治疗提供信息和决策依据

PCR诊断主要通过引物介导特异性扩增目的基因 以检测内源性或外源性目的基因的存在与否，进而对 疾病的预防、诊断、和治疗提供信息和决策依据。 一 PCR诊断技术原理

一PCR诊断技术原理PCR诊断技术流程动物性材料DNA分离引物设计植物性材料琼脂糖凝胶电泳DNA分离分离核酸相关实验开展PCR扩增RNA病毒动物性材料PCR检测RNA分离电泳检测DNA病毒PCR检测

PCR诊断技术流程 引物设计 分离核酸 PCR扩增 电泳检测 动物性材料 DNA分离 植物性材料 DNA分离 动物性材料 RNA分离 DNA病毒 PCR检测 RNA病毒 PCR检测 琼脂糖凝胶 电泳 相关实验开展 一 PCR诊断技术原理

二PCR技术基本知识回顾PCR技术简史口PCR的原理

二 PCR技术基本知识回顾 p PCR技术简史 p PCR的原理

DNA的复制核酸体外扩增的设想PCR技术简史聚合酶链反应的发明DNA解旋解链5ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC解旋酶解链酶合成引物TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3'子链延长

PCR技术简史 • DNA的复制 • 核酸体外扩增的设想 • 聚合酶链反应的发明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ 解旋酶解链酶 DNA 解旋解链 合成引物 子链延长

DNA的复制核酸体外扩增的设想PCR技术简史聚合酶链反应的发明3'5ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGCDNA解旋解链引物酶RNA引物合成引物RNA引物引物酶子链延长TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3'5

PCR技术简史 • DNA的复制 • 核酸体外扩增的设想 • 聚合酶链反应的发明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ DNA 解旋解链 合成引物 子链延长 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ 引物酶 引物酶 RNA引物 RNA引物

DNA的复制核酸体外扩增的设想PCR技术简史聚合酶链反应的发明3'6ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGCDNA解旋解链DNATAGCGCTATCGCATCGACGCT5'聚合酶3合成引物5'3'DNA聚合酶GTAGCTGCGAGGATCG子链延长TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3'5

PCR技术简史 • DNA的复制 • 核酸体外扩增的设想 • 聚合酶链反应的发明 ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC 5’ 3’ TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG 3’ 5’ DNA 解旋解链 合成引物 子链延长 GGAUCG 5‘ AUCGCG 5‘ TAGCGCTATCGCATCGACGCT 3’ ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG 3’ DNA 聚合酶 DNA 聚合酶

DNA的复制核酸体外扩增的设想PCR技术简史聚合酶链反应的发明1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。一但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了

PCR技术简史 • DNA的复制 • 核酸体外扩增的设想 • 聚合酶链反应的发明 ü 1971年，Khorana提出：经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶 延伸引物，并不断重复该过程便可 克隆tRNA基因。 ü 但由于测序和引物合成的困难，以 及70年代基因工程技术的发明使克 隆基因成为可能，所以，Khorana的 设想被人们遗忘了

DNA的复制核酸体外扩增的设想PCR技术简史聚合酶链反应的发明1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR）基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制最初采用E-ColiDNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪1993年，Mul1is等因此项技术获诺贝尔化学奖

PCR技术简史 • DNA的复制 • 核酸体外扩增的设想 • 聚合酶链反应的发明 • 1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明 了聚合酶链反应（PCR） • 基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制 • 最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶 不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错 • 耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行， 随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循 环仪 • 1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖

KaryB.Mullis>1989年美国《Science》杂志列PCR为十余项重大科学发明之首，比喻1989年为PCR爆炸年，Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。PCR只是一个简单的不起眼玩艺。凯利·穆利斯（KaryMullis）我不认为PCR能够用两种“革命”（政治革命和科学革命)加以说明。…··它的发明并没有改变基因操作的本质。有了PCR，我们能在更广的范围内更快、更容易地进行基因操作，学术界也完全不用等到某人死去或退休后才能接受PCR。它只不过是一种新工具。凯利·穆利斯（KaryMullis）

Ø 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科 学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获 1993年度诺贝尔化学奖。 Ø PCR只是一个简单的不起眼玩艺。 ——凯利·穆利斯（Kary Mullis) Ø 我不认为PCR能够用两种“革命”(政治革命和科学 革命)加以说明。.它的发明并没有改变基因操作 的本质。有了PCR，我们能在更广的范围内更快、更 容易地进行基因操作，学术界也完全不用等到某人 死去或退休后才能接受PCR。它只不过是一种新工具。 ——凯利·穆利斯（Kary Mullis)