华南师范大学：《遗传学》课程教学资源（实验指导）实验一 果蝇（Drodophila melanogaster）的观察与试验设计

果蝇（fruitfly）是双翅目（Diptera）昆虫，属果蝇属（genueDrosophila），约有九百多种，通常作遗传学实验材料的是黑腹果蝇（Drosophilamelanogaster），果蝇用作实验材料有许多优点。（1）饲养容易，在常温下，以玉米粉等为饲料就可以生长繁殖。(2）生长迅速。在23℃~25℃下，9～11天就可以完成一个世代，每个世代，每个受精的雌蝇可产卵400~500个，因此在短期内就可以获得大量子代，便于遗传学分析。(3)染色体少：只有4对。（4)睡腺染色体制作容易，横纹清晰，是遗传学研究的好材料。(5)突变性状少，而且多数是形态突变，便于观察。果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的好材料，尤其在基因分离、连锁、交换等方面，对果蝇的研究更是广泛而充分。、果蝇的生活史它的生活史包括卵一→幼虫→蛹一→成虫。果蝇的生活周期长短与温度关系很密切，30℃C以上的温度能使果蝇不育和死亡，低温则使它生活周期延长，同时生活力也减低，果蝇培养的最适温度20一25℃。如下图10°℃15℃20℃25°℃卵一幼虫8557day18 day6.34.2幼虫→成虫从表中可以看出25℃C时，从卵到成虫约10天，在25℃时成虫约活15天，果蝇一般是培养在恒温箱内，盛夏时，要注意降温。果蝇有雌雄之分，幼虫期区别较难，成虫区别容易（见下表）。雄性雌性·体形较小。体性较大腹部背面有5条环纹·腹部背面有7条环纹肉眼鉴别腹部末端较尖而且颜色深腹部末端较圆而且颜色浅腹部腹面可见四个腹片·腹部腹面可见六个腹片解部剖镜下观：腹部腹面尾端可见生殖拱和阴茎·腹部腹面尾端可见阴道察板第一对足的节第一节内侧有一排梳状黑毛，称性梳”（sex-combs）·无“性梳

果蝇 (fruit fly) 是双翅目 (Diptera) 昆虫，属果蝇属 (genue Drosophila ) ，约有九百多种，通常作遗传 学实验材料的是黑腹果蝇 ( Drosophila melanogaster) ，果蝇用作实验材料有许多优点。 (1) 饲养容易，在常温下，以玉米粉等为饲料就可以生长繁殖。 (2) 生长迅速。在 23 ℃ ~ 25 ℃ 下， 9 ～ 11 天就可以完成一个世代，每个世代，每个受精的雌蝇可 产卵 400~500 个，因此在短期内就可以获得大量子代，便于遗传学分析。 ⑶染色体少：只有 4 对。 ⑷唾腺染色体制作容易，横纹清晰，是遗传学研究的好材料。 ⑸突变性状少，而且多数是形态突变，便于观察。 果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点，是研究遗传学的好材料，尤其在基因分离、连 锁、交换等方面．对果蝇的研究更是广泛而充分。 一、果蝇的生活史 它的生活史包括卵→ 幼虫→ 蛹 →成虫。果蝇的生活周期长短与温度关系很密切， 30 ℃ 以上的温度 能使果蝇不育和死亡，低温则使它生活周期延长，同时生活力也减低，果蝇培养的最适温度 20 — 25 ℃ 。如下图 10 ℃ 15 ℃ 20 ℃ 25 ℃ 卵→幼虫 幼虫 →成虫 57day 18 day 8 6.3 5 4.2 从表中可以看出 25 ℃ 时，从卵到成虫约 10 天，在 25 ℃ 时成虫约活 15 天，果蝇一般是培养在恒温 箱内，盛夏时，要注意降温。 果蝇有雌雄之分，幼虫期区别较难，成虫区别容易（见下表）。 雄性 雌性 肉眼鉴别 • 体形较小 • 腹部背面有 5 条环纹 • 腹部末端较尖而且颜色深 • 体性较大 • 腹部背面有 7 条环纹 • 腹部末端较圆而且颜色 浅 解剖镜下观 察 • 腹部腹面可见四个腹片 • 腹部腹面尾端可见生殖拱和阴茎 • 第一对足的跗节第一节内侧有一排梳状 黑毛，称“性梳”（ sex-combs ） • 腹部腹面可见六个腹片 • 腹部腹面尾端可见阴道 板 • 无“性梳

二、果蝇的繁育果蝇在水果雄或果园里常可见到，但它并不是以水果为生，而是食生长在水果上的酵母菌，因此实验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇饲料。目前果蝇饲料较好的配方如下A：糖6.2克，加琼脂0.62克，再加水38毫升，煮沸溶解。B：玉米粉0.25克，加水38毫升，加热搅拌均匀后，再加0.7克酵母粉A和B混合加热成糊状后，加0.5毫升丙酸，即克分装到培养瓶中。除了以上的饲料外，常用的还有米粉饲料和香蕉饲料。1：米粉饲料的配制：琼脂0.9一2.5克加入100毫升水中，加热煮沸溶解；再加10克红糖，待溶解后将8克米粉（或麸皮）倒入正在煮沸的琼脂一一红糖溶液中去，不断搅拌煮沸数分钟，待成稀粥状后即可分装使用2.香蕉饲料配制：将熟透的香蕉捣碎，制成香蕉浆（约50克）。将1.5克琼脂加到48毫升的水中煮沸，溶解后拌入香蕉浆，再煮沸后即可分装以上两种饲料容易生霉菌，必要时需加少量肪毒剂。培养果蝇的饲养瓶，常用的有牛奶瓶，大中型指管，用纱巾包裹的棉花球作瓶塞（有条件的地方可改用泡沫塑料作瓶塞），饲养瓶先消毒，然后倒入饲料（2厘米厚），待冷却后，用酒精棉擦瓶壁，然后滴入酵母菌液数滴，再插入消毒过的吸水纸．作为幼虫化蛹时的干燥场所。三、果蝇处理对果蝇进行检查时，可用乙醚麻醉，使它保持静止状态，因果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，麻醉的深度看实验要求而定（作种蝇以轻度麻醉为宜，做观察可深度麻醉，致死也无妨。果蝇翅膀外展45°℃角表示已死亡）。麻醉后的果蝇放在白瓷板上检查，完毕后倒入煤油或酒精瓶中（死蝇盛留器）。四、原种培养在作为新的留种培养时，事先检查一下果蝇有没有混杂，以防原种丢失。亲本的数目一般股每瓶510对，移入新培养瓶时，须将瓶横卧，然后将果蝇挑入，待果蝇清醒过来后，再把培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上。原种每2一4周换一次培养基（按温度而定），每一原种培养至少保留两套。培养瓶上标签要写明名称，培养日期等，作为原种培养，可控制到10～15°℃C，培养时避免日光直射。五、实验交配果蝇雌体生殖器官有受精囊，可保留交配所得的大量精子，能使大量的卵受精，因此在做品系间杂交时，雌体必须选用处女蝇。雌蝇孵出后几小时内不会交配，所以把老果蝇除去后，几小时内所收集到的雌体必为处女蝇。由于雌蝇两天内不产卵，所以雄蝇可直接放到处女蝇培养瓶中（也可以放在盛有食物的小瓶中暂养两天，直到雌蝇将要产卵时放回培养瓶中）。贴好标健。写明交配日期，当子蝇即将孵化出来以前，也就是说23℃培养7一9天，倒出亲本，以免和亲代混淆。另一方面应该注意，杂文的F1代的计数安全期是自培养开始的20天内（因为再晚些，F2也可能有了）

二、果蝇的繁育 果蝇在水果摊或果园里常可见到，但它并不是以水果为生，而是食生长在水果上的酵母菌，因此实 验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇饲料。目前果蝇饲料较好的配方如下： A ：糖 6.2 克 ，加琼脂 0.62 克 ，再加水 38 毫升，煮沸溶解。 B ：玉米粉 0.25 克 ，加水 38 毫升，加热搅拌均匀后，再加 0.7 克 酵母粉。 A 和 B 混合加热成糊状后，加 0.5 毫升丙酸，即克分装到培养瓶中。 除了以上的饲料外，常用的还有米粉饲料和香蕉饲料。 1 ．米粉饲料的配制：琼脂 0.9 — 2.5 克 加入 100 毫升水中，加热煮沸溶解；再加 10 克 红糖，待溶 解后将 8 克 米粉 ( 或麸皮 ) 倒入正在煮沸的琼脂——红糖溶液中去，不断搅拌煮沸数分钟，待成稀粥 状后即可分装使用。 2 ．香蕉饲料配制：将熟透的香蕉捣碎，制成香蕉浆（约 50 克 ) 。将 1.5 克 琼脂加到 48 毫升的水中 煮沸，溶解后拌入香蕉浆，再煮沸后即可分装。 以上两种饲料容易生霉菌，必要时需加少量肪霉剂。 培养果蝇的饲养瓶，常用的有牛奶瓶，大中型指管，用纱巾包裹的棉花球作瓶塞 ( 有条件的地方可改 用泡沫塑料作瓶塞 ) ，饲养瓶先消毒，然后倒入饲料 ( 2 厘米 厚 ) ，待冷却后，用酒精棉擦瓶壁，然 后滴入酵母菌液数滴，再插入消毒过的吸水纸．作为幼虫化蛹时的干燥场所。 三、果蝇处理 对果蝇进行检查时，可用乙醚麻醉，使它保持静止状态，因果蝇对乙醚很敏感，易麻醉，麻醉的深 度看实验要求而定（作种蝇以轻度麻醉为宜，做观察可深度麻醉，致死也无妨。果蝇翅膀外展 45 ℃ 角表示已死亡 ) 。麻醉后的果蝇放在白瓷板上检查，完毕后倒入煤油或酒精瓶中（死蝇盛留器）。 四、原种培养 在作为新的留种培养时，事先检查一下果蝇有没有混杂，以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶 5 — 10 对，移入新培养瓶时，须将瓶横卧，然后将果蝇挑入，待果蝇清醒过来后，再把培养瓶竖起，以 防果蝇粘在培养基上。 原种每 2 — 4 周换一次培养基（按温度而定），每一原种培养至少保留两套。培养瓶上标签要写明 名称，培养日期等，作为原种培养，可控制到 10 ～ 15 ℃，培养时避免日光直射。 五、实验交配 果蝇雌体生殖器官有受精囊，可保留交配所得的大量精子，能使大量的卵受精，因此在做品系间杂 交时，雌体必须选用处女蝇。雌蝇孵出后几小时内不会交配，所以把老果蝇除去后，几小时内所收 集到的雌体必为处女蝇。由于雌蝇两天内不产卵，所以雄蝇可直接放到处女蝇培养瓶中 ( 也可以放在 盛有食物的小瓶中暂养两天，直到雌蝇将要产卵时放回培养瓶中 ) 。贴好标健。写明交配日期，当子 蝇即将孵化出来以前，也就是说 23 ℃ 培养 7 — 9 天，倒出亲本，以免和亲代混淆。另一方面应该注 意，杂文的 F 1 代的计数安全期是自培养开始的 20 天内（因为再晚些， F 2 也可能有了）