华南师范大学：《遗传学》课程教学资源（实验指导）实验九 人体染色体分带技术

（九）人体染色体分带技术一、实验原理染色体分带是20世纪70年代发展起来的技术，它借助特殊的处理程序，使染色体显现出深浅不同的染色带，染色带的数目、部位、宽窄与浓淡具有相对的稳定性，可作为鉴别染色体的重要依据，因此无论在遗传学的研究领域，还是在遗传病的诊断、动植物育种等应用方面，染色体分带都是很有用的技术。二、实验目的学习C带和G带显示方法三、实验材料1.小鼠骨髓细胞染色体标本片。2.人淋巴细胞染色体标本片。四、实验器具和药品1.器具恒温水箱、显微镜、立式染缸、温度计、镊子、量筒、烧杯、玻棒、漏斗、过滤纸250ml试剂瓶、大培养血、染色玻璃架、载片盒、砂笔。2：药品及配制（1)pH6.8PBS：Na2HPO4，2H205.92g：KH2PO44.5g蒸馏水1000ml。(2)0.2mol/LHCI：36%-38%浓度的HC16.5ml加到983.5ml蒸馏水中。（3）5%Ba（OH）2溶液：Ba（OH)25g溶于100ml蒸馏水中，过滤（用前配）。（4)2×SSC溶液：NaCI17.54g，柠檬酸钠8.82g，蒸馏水1000ml。(5)pH7.0ICN液：NaCI0.80g，KCI0.02g，Na2HPO4-12H200.30g，蒸馏水100ml。(6)pH7.0IKN：葡萄糖0.10g，KCl0.04g，NaCI0.80g，NaHCO30.035g，蒸馏水100ml。(7)0.25%Trypsin液：250mgTrypsin溶于100mlICN液中。（8)Giemsa原液。五、实验步骤1.C带技术（1）标本片用金钢砂笔编号后，放入0.2mol/LHCI的染缸中，室温下处理15min~30min，目的足使DNA脱嘌岭，但DNA骨架未断裂。(2)自来水冲洗。（3）将洗好的标本片放入5%Ba（OH)2的染缸中于50°C水浴处理10min，碱处理可能通过产生一个高水平的DNA变性，促进DNA溶解。(4)蒸馏水冲洗

（九）人体染色体分带技术 一、实验原理 染色体分带是 20 世纪 70 年代发展起来的技术，它借助特殊的处理程序，使染色体显 现出深浅不同的染色带，染色带的数目、部位、宽窄与浓淡具有相对的稳定性，可作为鉴别染色体的重要依据，因 此无论在遗传学的研究领域，还是在遗传病的诊断、动植物育种 等应用方面，染色体分带都是很有用的技术。 二、实验目的 学习 C 带和 G 带显示方法。 三、实验材料 1 ．小鼠骨髓细胞染色体标本片。 2 ．人淋巴细胞染色体标本片。 四、实验器具和药品 1 ．器具 恒温水箱、显微镜、立式染缸、温度计、镊子、量筒、烧杯、玻棒、漏斗、过滤纸 250ml 试剂瓶、大培养皿、染色玻璃架、载片盒、砂笔。 2 ．药品及配制 ， (1)pH 6.8PBS ： Na 2 HPO 4 ， 2H 2 O 5.92g ， KH 2 PO 4 4.5g 蒸馏水 1000ml 。 (2)0.2mol ／ L HCI ： 36 ％ -38 ％浓度的 HCl 6.5ml 加到 983.5ml 蒸馏水中。 (3)5 ％ Ba(OH) 2 溶液： Ba(OH) 2 5g 溶于 100ml 蒸馏水中，过滤 ( 用前配 ) 。 (4)2 × SSC 溶液： NaCl l 7.54g ，柠檬酸钠 8.82g ，蒸馏水 1000ml 。 (5)pH7.0 ICN 液： NaCl 0.80g ， KCl 0.02g ， Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 0.30g ，蒸馏水 100ml 。 (6)pH7.0 IKN ：葡萄糖 0.10g ， KCl 0.04g ， NaCl 0.80g ， NaHCO 3 0.035g ，蒸馏水 100ml 。 (7)0.25 ％ Trypsin 液： 250mgTrypsin 溶于 100mlICN 液中。 (8)Giemsa 原液。 五、实验步骤 1 ． C 带技术 (1) 标本片用金钢砂笔编号后，放入 0.2mol ／ L HCI 的染缸中，室温下处理 15min ～ 30min ，目的足使 DNA 脱嘌 岭，但 DNA 骨架末断裂。 (2) 自来水冲洗。 (3) 将洗好的标本片放入 5 ％ Ba(OH) 2 的染缸中于 50 ℃ 水浴处理 10min ，碱处理可能通过产生一个高水平的 DNA 变性，促进 DNA 溶解。 (4) 蒸馏水冲洗

5）在2×SSC溶液巾60C保温30min，使DNA骨架断裂并使断片溶解（6）蒸馏水冲洗（7)l：10Giemsa染色10min，C带的基本特征是从染色体臂选择性地抽取DNA，而C带区DNA对抽提有较大的抗性，从而保留了一部分DNA，因此用Giemsa染液巾可显示出DNA的不同分布。（8）自来水冲洗、干燥。（9）镜检：低倍镜下找到分散好的细胞中期分裂相，换油镜仔细观察C带特点，如着丝粒区域或异染色质部位、次痕及Y染色体深染、染色体其它部位浅染，即为可取标本。2.G带技术（1）标本片置60℃烘箱中16h~24h。（2）取烘过的标本置预热到37℃的025%Trypsin液中0.5min~lmin（处理时间随气温和片冷而异），近年来的研究表明，用Trypsin处理染色体标本是G带显示的一种预处理方式，它可以从染色体上抽取蛋白质的特定组成部分。Giemsa是噻嗪-曙红染料，染色首先取决于二个分子同DNA结合，在此基础上它们结合一个曙红分子，其次取决于有助于染料沉淀物累积的疏水环境，通过Trypsin预处理可以使阴性G带区的疏水蛋白被除去或使它们的构型变为更疏水状态。由此可见在G带中抽取蛋白往往是疏水的，而且主要来自阴性G带区，（3）用pH6.8PBS配制的5%Giemsa液染色10min~20min。（4）蒸馏水漂洗数次，空气干燥。（5）镜检：低倍镜下找到分散好的细胞中期分裂相，换油镜仔细观察G带，染色体上若出现清晰的深浅相间的带型，即为可取标本。六、注意事项1.在C带技术中，若观察到染色体均呈白色，可能是碱处理或2×SSC温育过度了。2，在G带技术中，若观察到染色体变粗、边缘发毛，有时甚至成糊状，那可能是处理过度了七、作业1·交C带、G带标本各一张2.思考C带技术和G带技术原理的异同

(5) 在 2 × SSC 溶液巾 60 ℃ 保温 30min ，使 DNA 骨架断裂并使断片溶解。 (6) 蒸馏水冲洗。 (7)1 ： 10Giemsa 染色 10min ， C 带的基本特征是从染色体臂选择性地抽取 DNA ，而 C 带区 DNA 对抽提有较大的 抗性，从而保留了一部分 DNA ，因此用 Giemsa 染液巾可显示出 DNA 的不同分布。 (8) 自来水冲洗、干燥。 (9) 镜检：低倍镜下找到分散好的细胞中期分裂相，换油镜仔细观察 C 带特点，如着丝粒区域或异染色质部位、次 缢痕及 Y 染色体深染、染色体其它部位浅染，即为可取标本。 2 ． G 带技术 (1) 标本片置 60 ℃ 烘箱中 16h~24h 。 (2) 取烘过的标本置预热到 37 ℃ 的 0 ． 25 ％ Trypsin 液中 0.5min ～ lmin( 处理时间随气温和片冷而异 ) ，近年来的 研究表明，用 Trypsin 处理染色体标本是 G 带显示的一种预处理方式，它可以从染色体上抽取蛋白质的特定组成部 分。 Giemsa 是噻嗪－曙红染料，染色首先取决于二个分子同 DNA 结合，在此基础上它们结合一个曙红分子，其次 取决于有助于染料沉淀物累积的疏水环境，通过 Trypsin 预处理可以使阴性 G 带区的疏水蛋白被除去或使它们的构 型变为更疏水状态。由此可见在 G 带中抽取蛋白往往是疏水的，而且主要来自阴性 G 带区． (3) 用 pH6.8PBS 配制的 5 ％ Giemsa 液染色 10min~20min 。 (4) 蒸馏水漂洗数次，空气干燥。 (5) 镜检：低倍镜下找到分散好的细胞中期分裂相，换油镜仔细观察 G 带，染色体上若出现清晰的深浅相间的带 型，即为可取标本。 六、注意事项 1 ．在 C 带技术中，若观察到染色体均呈白色，可能是碱处理或 2 × SSC 温育过度了。 2 ．在 G 带技术中，若观察到染色体变粗、边缘发毛，有时甚至成糊状，那可能是处理过度了 七、作业 1 ．交 C 带、 G 带标本各一张． 2 ．思考 C 带技术和 G 带技术原理的异同