沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验十一 动物贴壁细胞的冻存

思维导图概念1.冷冻保护剂；原则细胞冻存2.缓慢冻存；3.-196℃保存贴壁操作流程细胞的冻存与概念复苏1.快速复温；原则细胞复苏2.快速去除二甲基亚砜；操作流程

思维导图

预习问题（1）类比东北冬天的冻梨，如果直接将细胞冷冻会出现什么样的效果？（2）你如何看待人体冷冻技术？如果将来科技足够发达，你会选择该项服务么？（3）目前活体冻存与复苏技术的最大缺陷，你认为是什么？（4）冷冻保护剂在细胞冻存中的作用是什么？（5）利用《沈阳师范大学动物细胞培养虚拟教学平台》了解动物贴壁细胞的冻存与复苏过程

预习问题 （1）类比东北冬天的冻梨，如果直接将细胞冷冻会出现什么样的效果？ （2）你如何看待人体冷冻技术？如果将来科技足够发达，你会选择该项服务么？ （3）目前活体冻存与复苏技术的最大缺陷，你认为是什么？ （4）冷冻保护剂在细胞冻存中的作用是什么？ （5）利用《沈阳师范大学动物细胞培养虚拟教学平台》了解动物贴壁细胞的冻存与复苏过程

一、实验目的（1）掌握细胞复苏的基本原理；（2）熟练进行细胞复苏的操作；

（1）掌握细胞复苏的基本原理； （2）熟练进行细胞复苏的操作； 一 、实验目的

玻璃化冻存阿尔科于1972年成立，是全球最早从事人体冷冻技术研究和实践的机构之一。据其介绍，该项技术的核心理念是，通过极低温度保存人体，以便在未来医学科技进步到足以恢复人体健康时，能够“复活”人体。詹姆斯·阿罗伍德在接受红星新闻采访时表示：“死亡是一个过程性的事件，并不是一瞬间的事。人体冷冻技术就是目前为止“按下死亡进程暂停键”的最好方式

阿尔科于1972年成立，是全球最早从事人体冷冻技术研究和实践的机构之一。据 其介绍，该项技术的核心理念是，通过极低温度保存人体，以便在未来医学科技 进步到足以恢复人体健康时，能够“复活”人体。詹姆斯·阿罗伍德在接受红星 新闻采访时表示：“死亡是一个过程性的事件，并不是一瞬间的事。人体冷冻技 术就是目前为止‘按下死亡进程暂停键’的最好方式。” 玻璃化冻存

1963年，一位名叫贝德福德的70岁富豪被确诊了晚期肺癌1967年1月19日，首例成功冷冻保存于零下196°C的液氮罐中。1972年，转移到阿尔科生命延续公司继续保存。2017年，解冻，血液置换药剂导致脑死亡。尽管身体其他部位都得以完好保存

1963年，一位名叫贝德福德的70岁富豪被确诊了晚期肺癌。 1967年1月19日，首例成功冷冻保存于零下196°C的液氮罐中。 1972年，转移到阿尔科生命延续公司继续保存。 2017年，解冻，血液置换药剂导致脑死亡。尽管身体其他部位都 得以完好保存

杜虹是重庆知名儿童文学作家，2015年5月30日因胰腺癌去世。在去世之前，杜虹以及家人，转联系到了一个专门从事人体冰冻研究的科研机构美国阿尔科生命延续基金会（英文名称Alcor）该基金会是目前世界上最大的人体冷冻机构之一。杜虹一家选择了花费12万美金（约75万元人民币）大脑冷冻按AIcor科学家的乐观估计，50年后的科学技术也许就能让复活。杜虹解冻头部、再造身体，也就是一

杜虹是重庆知名儿童文学作家，2015年5月30日因胰腺癌去世。在 去世之前，杜虹以及家人，辗转联系到了一个专门从事人体冰冻 研究的科研机构——美国阿尔科生命延续基金会(英文名称Alcor)。 该基金会是目前世界上最大的人体冷冻机构之一。杜虹一家选择了花费12万美 金(约75万元人民币)大脑冷冻。 按Alcor科学家的乐观估计，50年后的科学技术也许就能让 杜虹解冻头部、再造身体，也就是——复活

李泽厚，旅居美国的我国著名思想家、哲学家、美学家：于2021年11月2日在美国科罗拉多州博尔德小镇家中因病去世。美国“阿尔科生命延续基金会”（简称“阿尔科”履行了李先生的生前遗属“我不会有墓志铭。但我准备将来把脑袋留下来，冷冻，过300年或者500年再拿出来。”90岁生日前夕接受采访时，他重申了此事，并说“我不是随便讲句空话而已”，已向“阿尔科”捐赠8万美元，每年还付几百美元的会员费我是想证明文化是不是影响了天脑，几百年后，是不是可以从我的大脑里发现中国文化的残迹，证明我的积淀理论。如果证明有影响（文化影响大脑），我觉得比我所有书加起来的贡献都要天

李泽厚，旅居美国的我国著名思想家、哲学家、美学 家； 于2021年11月2日在美国科罗拉多州博尔德小镇家中 因病去世。 美国“阿尔科生命延续基金会”（简称“阿尔科”） 履行了李先生的生前遗嘱——“我不会有墓志铭。但 我准备将来把脑袋留下来，冷冻，过300年或者500年 ，再拿出来。”90岁生日前夕接受采访时，他重申了 此事，并说“我不是随便讲句空话而已”，已向“阿 尔科”捐赠8万美元，每年还付几百美元的会员费。 “我是想证明文化是不是影响了大脑，几百年后，是 不是可以从我的大脑里发现中国文化的残迹，证明我 的积淀理论。如果证明有影响（文化影响大脑），我 觉得比我所有书加起来的贡献都要大

为什么不能保持原样？

为什么不能保持原样？

细胞内水的状态？

细胞内水的状态？

理论上讲，细胞外水的冻结温度为-5~-15℃。.-30℃时,细胞内几乎没有非冻结状态的游离水存在；·结合水在-100℃温度下也不冻结。任何一个冰晶对细胞都会是致命的伤害

• 理论上讲，细胞外水的冻结温度为-5～-15℃。 • -30℃ 时，细胞内几乎没有非冻结状态的游离水存在； • 结合水在- 100℃ 温度下也不冻结。 • 任何一个冰晶对细胞都会是致命的伤害