沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察

回顾1.显微镜的“专业”操作。国青2.标准的生物科研绘图。3.暗视野下神奇的世界。4.实验设计：单盲、双盲、阳性对照、阴性对照。5.实验数据处理理念：组内重复，组间差异和组内差异。6.染色：①詹纳斯绿B染色（原理）②中性红染色

回顾 1.显微镜的“专业”操作。 2.标准的生物科研绘图。 3.暗视野下神奇的世界。 4.实验设计：单盲、双盲、阳性对照 、阴性对照。 5.实验数据处理理念：组内重复，组 间差异和组内差异。 6.染色：①詹纳斯绿B染色（原理） ②中性红染色

实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察

实验五 植物细胞骨架的 光学显微镜观察

预习问题细胞骨架的功能、分布、组成成分？除了考马斯亮蓝染色，其它的细胞骨架染色方法？考马斯亮蓝为什么可以染细胞骨架？为什么考马斯亮蓝能特异性的对细胞骨架染色？曲拉通的生物学作用？M一缓冲液的作用？戊二醛在本实验里的作用

预习问题 • 细胞骨架的功能、分布、组成成分？ • 除了考马斯亮蓝染色，其它的细胞骨架染色方法？ • 考马斯亮蓝为什么可以染细胞骨架？ • 为什么考马斯亮蓝能特异性的对细胞骨架染色？ • 曲拉通的生物学作用？ • M-缓冲液的作用？ • 戊二醛在本实验里的作用

实验目的心掌握植物细胞骨架标本的基本制备方法：掌握考马斯亮蓝R250对细胞骨架的染色方法（前辈&理解细胞骨架标本制作方法的设计原理们是怎么想的？）

一 、实验目的 ❖掌握植物细胞骨架标本的基本制备方法； ❖掌握考马斯亮蓝R250对细胞骨架的染色方法； ❖理解细胞骨架标本制作方法的设计原理（前辈 们是怎么想的？）；

二、实验原理实验对象：细胞骨架（分布、成分、形态、功能）图：老鼠成纤维细胞的荧光蛋白和微管（结构蛋白），1000x2003尼康年度微型照片大赛：TorstenWittmann，Scripps研究院

二、实验原理 实验对象：细胞骨架（分布、成分、形态、功能） 图：老鼠成纤维细胞的荧光蛋白和微管 (结构蛋白)，1000x 2003尼康年度微型照片大赛: Torsten Wittmann, Scripps研究院

细胞骨架：广义的细胞骨架：细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架、细胞外基质。狭义的细胞骨架：细胞质骨架，分为微丝、微管和中间纤维。A：微丝（MF），B：微管（MT）C:中间丝（IF）D：叠加图像细胞骨架（cytoskeleton）是细胞以蛋白质纤维为主要成分的网络结构

细胞骨架(cytoskeleton)是细胞以蛋白质纤维为主要成分 的网络结构。 ⚫ 广义的细胞骨架：细胞核骨架、 细胞质骨架、细胞膜骨架、细 胞外基质。 ⚫ 狭义的细胞骨架：细胞质骨架， 分为微丝、微管和中间纤维。 细胞骨架： A:微丝（MF）， B:微管（MT） C:中间丝（IF）, D:叠加图像

细胞骨架的功能口维持细胞的形态结构、内部结肌动蛋白丝中间丝构的合理排布起支架作用！肌动蛋白丝口对于细胞运动与细胞器的位移、物质运输、能量转换、基因表达微管中间丝神经元突起蛋白合成，信号传导和细胞分裂A马达蛋白动蛋白丝等有重要作用。微管口细胞骨架的异常可引起多种疾微管病，如遗传病、肿瘤神经系统疾马达蛋白分裂细胞小肠上皮细胞病等

 维持细胞的形态结构、内部结 构的合理排布起支架作用！  对于细胞运动与细胞器的位移、 物质运输、能量转换、基因表达、 蛋白合成，信号传导和细胞分裂 等有重要作用。  细胞骨架的异常可引起多种疾 病，如遗传病、肿瘤神经系统疾 病等。 细胞骨架的功能

实验对象被利用的特性预测的观察结果分布：功能：C主要组成：形状：细胞骨架细胞核、细胞架维持细胞的形态结构，内部结构蛋白质致密的网状0000质、细胞膜、的合理排布起支架作用！细胞间质。细胞运动与细胞器的位移、物质运输、能量转换、基因表达、蛋白合成，信号传导和细胞分裂等

细胞骨架 实验对象 预测的观察结果 形状： 致密的网状 分布： 细胞核、细胞 质、细胞膜、 细胞间质。 功能： 架维持细胞的形态结构，内部结构 的合理排布起支架作用！ 细胞运动与细胞器的位移、物质运 输、能量转换、基因表达、蛋白合 成，信号传导和细胞分裂等。 被利用的特性 主要组成： 蛋白质

常用的细胞骨架的观察方法：荧光素标记的鬼笔环肽染色法、问接免疫荧法考马斯亮蓝R250染色法等。m50m500Control(Oμg.mLm-Mg-MOF74n50021n50Control (Oug-mL-)n-Mg-MOF74OX

常用的细胞骨架的观察方法： 荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫荧法、 考马斯亮蓝R250染色法等

细胞骨架实验对象：主要成分：蛋白质既然是个蛋白质网络，找个专门染蛋白质的染料就好了考马斯亮蓝（蛋白质特异性染料）细胞浑身遍布蛋白质，如如果直接加在洋葱表皮细胞上①细胞膜、细胞质、细胞核②溶解性蛋白质、结合性蛋白质我是细胞蓝色的胖子非细胞骨架蛋白③细胞骨架蛋白、巴拉巴拉巴拉，都很喜好多好多蛋白，欢考马斯亮蓝为什么？

实验对象：细胞骨架 主要成分：蛋白质 既然是个蛋白质网络，找个专门染蛋白质的染料就好了 考马斯亮蓝（蛋白质特异性染料） 我是细胞，蓝色的胖子 如果直接加在洋葱表皮细胞上. 为什么？ 细胞浑身遍布蛋白质，如: ① 细胞膜、细胞质、细胞核 ② 溶解性蛋白质、结合性蛋白质 ③ 细胞骨架蛋白、非细胞骨架蛋白 巴拉巴拉巴拉，好多好多蛋白，都很喜 欢考马斯亮蓝