沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验九 贴壁细胞的冻存与复苏

实验九贴壁细胞的冻存与复苏

实验九 贴壁细胞的冻 存与复苏

思维导图概念1.冷冻保护剂；原则细胞冻存2.缓慢冻存；3.-196℃保存贴壁操作流程细胞的冻存与概念复苏1.快速复温；原则细胞复苏2.快速去除二甲基亚砜；操作流程

思维导图

预习问题（1）类比东北冬天的冻梨，如果直接将细胞冷冻会出现什么样的效果？（2）你如何看待人体冷冻技术？如果将来科技足够发达，你会选择该项服务么？（3）目前活体冻存与复苏技术的最大缺陷，你认为是什么？（4）冷冻保护剂在细胞冻存中的作用是什么？（5）利用《沈阳师范大学动物细胞培养虚拟教学平台》了解动物贴壁细胞的冻存与复苏过程

预习问题 （1）类比东北冬天的冻梨，如果直接将细胞冷冻会出现什么样的效果？ （2）你如何看待人体冷冻技术？如果将来科技足够发达，你会选择该项服务么？ （3）目前活体冻存与复苏技术的最大缺陷，你认为是什么？ （4）冷冻保护剂在细胞冻存中的作用是什么？ （5）利用《沈阳师范大学动物细胞培养虚拟教学平台》了解动物贴壁细胞的冻存与复苏过程

一、实验目的（1）掌握细胞冻存与复苏的基本原理：（2）熟练进行细胞冻存与复苏的操作：

（1）掌握细胞冻存与复苏的基本原理； （2）熟练进行细胞冻存与复苏的操作； 一 、实验目的

杜虹是重庆知名儿童文学作家，2015年5月30日因胰腺癌去世。在去世之前，杜虹以及家人，转联系到了一个专门从事人体冰冻研究的科研机构美国阿尔科生命延续基金会（英文名称Alcor）该基金会是目前世界上最大的人体冷冻机构之一。杜虹一家选择了花费12万美金（约75万元人民币）大脑冷冻按AIcor科学家的乐观估计，50年后的科学技术也许就能让复活。杜虹解冻头部、再造身体，也就是一

杜虹是重庆知名儿童文学作家，2015年5月30日因胰腺癌去世。在 去世之前，杜虹以及家人，辗转联系到了一个专门从事人体冰冻 研究的科研机构——美国阿尔科生命延续基金会(英文名称Alcor)。 该基金会是目前世界上最大的人体冷冻机构之一。杜虹一家选择了花费12万美 金(约75万元人民币)大脑冷冻。 按Alcor科学家的乐观估计，50年后的科学技术也许就能让 杜虹解冻头部、再造身体，也就是——复活

http://biossma.com.cn/meiguimeigui777冻梨原因?

原因？

细胞内水的状态？结冰？

细胞内水的状态？ 结冰？

理论上讲，细胞外水的冻结温度为-5~-15℃。.-30℃时,细胞内几乎没有非冻结状态的游离水存在；·结合水在-100℃温度下也不冻结。任何一个冰晶对细胞都会是致命的伤害

• 理论上讲，细胞外水的冻结温度为-5～-15℃。 • -30℃ 时，细胞内几乎没有非冻结状态的游离水存在； • 结合水在- 100℃ 温度下也不冻结。 • 任何一个冰晶对细胞都会是致命的伤害

二、 实验原理细胞冷冻技术的关键是：尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成1.冷冻保护剂2.降温速度3.复温速度4.保存温度

细胞冷冻技术的关键是： 尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。 1.冷冻保护剂 2.降温速度 3.复温速度 4.保存温度 二、实验原理

1、冷冻保护剂冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。分为渗透性和非渗透性两类。对大多数有核哺乳类动物细胞来说，在不加冷冻保护剂的情况下，无最适冷冻速率可言，也不能获得活的冻存物

1、冷冻保护剂 冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物质。 分为渗透性和非渗透性两类。 对大多数有核哺乳类动物细胞来说，在不加冷冻保护剂的情况 下，无最适冷冻速率可言，也不能获得活的冻存物