沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验二 暗视野显微镜的制作与观察

回顾·1.显微镜的“专业”操作。国·2.标准的生物科研绘图

回顾 • 1.显微镜的“专业”操作。 • 2.标准的生物科研绘图

实验二、暗视野显微镜的制作与使用实验目的：（1）掌握暗视野显微镜的工作原理；（2）了解暗视野显微镜的观察特点：

实验二、暗视野显微镜的制作与使用 实验目的： （1）掌握暗视野显微镜的工作原理； （2）了解暗视野显微镜的观察特点；

只能看到物体的存在和运动，不能辩清物体的细微结构。，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等

•只能看到物体的存在和运动,不能辩清物体的细微 结构。 •可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等

暗视野显微镜观察特点（优越性）·可分辨0.004um以上微粒的存在和运动普通光学显微镜最大分辨力为0.2um。·胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动·原虫、细菌的鞭毛、伪足运动·医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或各种粒子无需染色的

• 可分辨0.004um以上微粒的存在和运动，普通光学显微镜最大分 辨力为0.2um。 • 胶体化学领域中观察溶质粒子的布朗运动， • 原虫、细菌的鞭毛、伪足运动， • 医学检验学范围适用于观察人体体液中螺旋体、尿管形、结晶或 各种粒子。 • 无需染色的。 暗视野显微镜观察特点（优越性）

暗视野显微镜下显示梅毒螺旋体暗视野显微镜检测透明触摸屏表面损伤《微观帝国》暗视野显微技术（团藻）

暗视野显微镜下显示梅毒螺旋体 暗视野显微镜检测透明触摸屏表面损伤 《微观帝国》暗视野显微技术（团藻）

图剑水蚤（4x）图剑水蚤（4x）采用暗场技术采用暗场技术摄影：未知摄影：沈师某位咖怀孕大型水蚤（4x）图像叠加等技术采用改良暗场、偏振光、摄影：MarekMis

图 怀孕大型水蚤（ 4x ） 采用改良暗场、偏振光、图像叠加等技术 摄影：Marek Miś 图 剑水蚤（ 4x ） 采用暗场技术 摄影：沈师某位咖 图 剑水蚤（ 4x ） 采用暗场技术 摄影：未知

实验原理光学上的丁达尔原理使用遮光板或暗视野聚光器，使光源的中央光束被阻挡，直射光不能由下而上地通过标本进入物镜，整个视野是黑暗的，由样品发出的衍射光和反射光形成了明亮的物体影象。思考：暗视野成像是否需要光？是什么光？样本发出的光从哪来的？

一、实验原理 光学上的丁达尔原理。 使用遮光板或暗视野聚光器,使光源的中央光束被 阻挡,直射光不能由下而上地通过标本进入物镜,整个 视野是黑暗的，由样品发出的衍射光和反射光形成了 明亮的物体影象。 思考：暗视野成像是否需要光？是什么光？ 样本发出的光从哪来的？

解读：·暗视野照明法是斜射照明法的一种。斜射光线绕射或反射，在被检样品表面形成散射的光层，构成标本外形的侧影衍射光图像。·暗视野显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动

• 暗视野照明法是斜射照明法的一种。 • 斜射光线绕射或反射，在被检样品表面形成散射的光层，构成标 本外形的侧影-衍射光图像。 • 暗视野显微镜下所看到的只是物体的轮廓或物体的运动。 解读：

载玻片聚光器物镜光源中央遮光板

光源 聚光器 载玻片 物镜 中央遮光板

实验步骤Objectivelens（1）将显微镜聚光器调到最高位置，打开孔径光阑；（2）调节视场光阑的大小，使其与镜筒中Stage所见物镜的视野相等，并调焦至边缘清晰（3）适当缩小视场光阑，并用厚黑纸剪Condenser制中央挡光板，大小与调节好的视场光阑等大。（4）将中央挡光板放在遮光器中央，制作样本观察。LightDark-fieldstop

二、实验步骤 （1）将显微镜聚光器调到最高位置,打开 孔径光阑； （2）调节视场光阑的大小,使其与镜筒中 所见物镜的视野相等，并调焦至边缘清晰. （3）适当缩小视场光阑，并用厚黑纸剪 制中央挡光板, 大小与调节好的视场光阑 等大。 （4）将中央挡光板放在遮光器中央，制 作样本观察