沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验五 植物原生质体的分离与诱导融合

实验五植物原生质体的分离与诱导融合

实验五 植物原生质体的分离 与诱导融合

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思维导图

预习问题·什么叫细胞融合？·如何获得植物（动物）的单个细胞？·植物细胞细胞壁成分，如何去除植物细胞壁？·细胞（原生质体）可以彼此融合，缘于细胞膜的哪种特质？·细胞融合的基本方法？（拓展学习原理）。·如果使用细胞A与细胞B融合，实验结果中会获得多少种融合细胞

预习问题 • 什么叫细胞融合？ • 如何获得植物（动物）的单个细胞？ • 植物细胞细胞壁成分，如何去除植物细胞壁？ • 细胞（原生质体）可以彼此融合，缘于细胞膜的哪种特质？ • 细胞融合的基本方法？（拓展学习原理）。 • 如果使用细胞A与细胞B融合，实验结果中会获得多少种融合细胞

一、实验目的（1）掌握获得植物单细胞的两种基本方法；（2）学会酶解法制备植物原生质体；（3）组内协作完成PEG诱导的植物原生质体诱导融合；（4）文献调研了解细胞融合技术的前沿应用进展；

一、实验目的 （1）掌握获得植物单细胞的两种基本方法； （2）学会酶解法制备植物原生质体； （3）组内协作完成PEG诱导的植物原生质体诱导融合； （4）文献调研了解细胞融合技术的前沿应用进展；

二、实验原理1.细胞融合（cellfusion）在诱导剂的作用下，两个或两个以上的同源或异源的细胞相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。1细胞工程学的重要研究内容：无菌操作下开展的实验23活的、完整的过程；今天，我们只是模拟一部分实验：胞质融合

二、实验原理 1. 细胞融合（cell fusion) 在诱导剂的作用下，两个或两个以上的同源或异源的细胞相互 接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现 象。 ① 细胞工程学的重要研究内容； ② 无菌操作下开展的实验； ③ 活的、完整的过程； 今天，我们只是模拟一部分实验：胞质融合

CGTV13新路B看了好多细胞分裂看看细胞融合自发细胞融合(spontaneous cell fusion)诱导细胞融合(induced cell fusion)细胞融合+细胞分裂

看了好多细胞分裂 看看细胞融合 自发细胞融合（spontaneous cell fusion） 诱导细胞融合（induced cell fusion） 细胞融合+细胞分裂

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苷 蓝＆青 菜 大 豆＆马唐草 矮牵牛＆龙面花 大 麦＆花 生 大 麦＆大 豆 小 麦＆矮牵牛 油 菜＆大 豆 玉 米＆大 豆 大 豆＆野豌豆 大 麦＆蚕 豆 大 豆＆香木犀 大 豆＆烟 草 大 豆＆秋水仙 番 茄＆马铃薯 鸡＆酵母菌 人＆胡萝卜 原生质体＆血红细胞 腹水癌细胞＆原生质体 人纤维肉瘤细胞＆鼠畸胎瘤细胞 人工诱导细胞融合的案例 只有想不到，没有做不到 的跨界

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经典应用： ① 单克隆抗体药物 ② 疫苗 ③ 靶向治疗等等 细胞工程里价值不菲的一项技术！

我们的实验的：动物细胞诱导动物细胞融合植物细胞↓植物原生质体诱导植物原生质体融合第二步第三步第一步

诱导动物细胞融合 诱导植物原生质体融合 动物细胞 植物细胞 植物原生质体 我们的实验目的： 第三步 第一步 第二步

2.第一步：单细胞的获得（1）物理的方法：机械法一力缺点：伤害性强，获得率低剪碎研磨原生质体（2）化学方法：酶解法“溶解掉”细胞与细胞之间的连接和细胞壁组合酶：果胶酶、纤维素酶和半纤维素物理方法：切开，使劲挣脱酶一步法，直接获得原生质体化学方法：有机溶剂溶解优点：获得率高；缺点：混入了相关酶类。这时候两根手指已经被粘住了

2. 第一步：单细胞的获得 剪碎 研磨 （1）物理的方法：机械法-力 缺点：伤害性强，获得率低 物理方法：🔪切开，使劲挣脱 化学方法：有机溶剂溶解 （2）化学方法：酶解法“溶解掉” 细胞与细胞之间的连接和细胞壁。 原生质体 组合酶：果胶酶、纤维素酶和半纤维素 酶一步法，直接获得原生质体； 优 点：获得率高； 缺 点：混入了相关酶类