沈阳师范大学：《细胞生物学实验》课程教学资源（教案讲义）实验四 植物细胞骨架的光学显微镜观察

第四节植物细胞骨架的光学显微镜观察

第四节 植物细胞骨架的光学显微镜观察

思维导图成分分布细胞骨架基本知识植物细胞骨架功能的光学显微镜曲拉通作用原理观察染色与观察洋葱表皮细胞骨架的考马斯亮蓝染色原理观察

思维导图

预习问题细胞骨架的功能、分布、组成成分？司除了考马斯亮蓝染色，其它的细胞骨架染色方法？考马斯亮蓝为什么可以染细胞骨架？为什么考马斯亮蓝能特异性的对细胞骨架染色？曲拉通的生物学作用？M-缓冲液的作用？口戊二醛在本实验里的作用

预习问题  细胞骨架的功能、分布、组成成分？  除了考马斯亮蓝染色，其它的细胞骨架染色方法？  考马斯亮蓝为什么可以染细胞骨架？  为什么考马斯亮蓝能特异性的对细胞骨架染色？  曲拉通的生物学作用？  M-缓冲液的作用？  戊二醛在本实验里的作用

实验目的心掌握植物细胞骨架标本的基本制备方法；掌握考马斯亮蓝R250对细胞骨架的染色方法；X心理解细胞骨架标本制作方法的设计原理

一 、实验目的 ❖ 掌握植物细胞骨架标本的基本制备方法； ❖ 掌握考马斯亮蓝R250对细胞骨架的染色方法； ❖ 理解细胞骨架标本制作方法的设计原理；

二、 实验原理细胞骨架的荧光染色图像

二、实验原理 细胞骨架的荧光染色图像

细胞骨架的形态、分布口广义的细胞骨架：细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架、细胞外基质。口狭义的细胞骨架：细胞质骨架，根据蛋白质纤维的直径、组成成分等的不同可分为丝、微管和中间纤维。细胞骨架(cytoskeleton)是细胞以蛋白质纤维为主要成分的网络结构

细胞骨架(cytoskeleton)是细胞以蛋白质纤维为主要成分 的网络结构。  广义的细胞骨架：细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨 架、细胞外基质。  狭义的细胞骨架：细胞质骨架，根据蛋白质纤维的直径、 组成成分等的不同可分为微丝、微管和中间纤维。 细胞骨架的形态、分布

细胞骨架的功能■细胞骨架维持细胞的形态结构，内部结构的合理排布起支架作用！■细胞骨架对于细胞运动与细胞器的位移、物质运输、能量转换、基因表达、蛋白合成，信号传导和细胞分裂等有重要作用。在哪里能找到细胞骨架！细胞骨架长个啥子样子！

 细胞骨架维持细胞的形态结构，内部结构的合理排布起 支架作用！  细胞骨架对于细胞运动与细胞器的位移、物质运输、能 量转换、基因表达、蛋白合成，信号传导和细胞分裂等 有重要作用。 细胞骨架的功能 在哪里能找到细胞骨架！细胞骨架长个啥子样子！

常用的细胞骨架的观察方法有：考马斯亮蓝R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、问接免疫荧光法等

常用的细胞骨架的观察方法有：考马斯亮蓝R250 染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫 荧光法等

实验对象：细胞骨架主要成分：蛋白质既然是个蛋白质网络找个专门染蛋白质的染料就好了考马斯亮蓝（蛋白质特异性染料）如果直接加在洋葱表皮细胞上....细胞浑身遍布蛋白质，如①细胞膜、细胞质、细胞核我是细胞蓝色的胖子（死的细胞）②溶解性蛋白质、结合性蛋白质③细胞骨架蛋白、非细胞骨架蛋白都很巴拉巴拉巴拉，好多好多蛋白，喜欢考马斯亮蓝为什么？

实验对象：细胞骨架 主要成分：蛋白质 既然是个蛋白质网络，找个专门染蛋白质的染料就好了 考马斯亮蓝（蛋白质特异性染料） 我是细胞，蓝色的胖子(死的细胞) 如果直接加在洋葱表皮细胞上. 为什么？ 细胞浑身遍布蛋白质，如: ① 细胞膜、细胞质、细胞核 ② 溶解性蛋白质、结合性蛋白质 ③ 细胞骨架蛋白、非细胞骨架蛋白 巴拉巴拉巴拉，好多好多蛋白，都很 喜欢考马斯亮蓝

如让考马斯亮蓝特异性的显色细胞骨架呢？曲拉通来啦（以下是我收集到的大家的答案）①将膜蛋白从细胞膜上解离下来：很好，细胞膜骨架没有了。②能溶容解脂质：很好，增加了细胞膜的通透性③曲拉通温和，留下细胞骨架蛋白和其它大部分的蛋白质：这是个坑，如果大部分蛋白质都留下了，还用曲拉通有何用？③适当浓度的TritonX100处理细胞时，微丝束属不可溶性蛋白，就不会被TritonX100破坏而保留：请注意“适当浓度”，弦外之音，如果浓度不当，细胞骨架也会没了。④去除膜系统，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶掉：骨架蛋白的疏水区呢？其实一样可以结合③细胞骨架在用非离子去垢剂处理时会保持非溶解状态。：请注意，是“保持”非溶解状态，说明细胞骨架没有改变状态而已

如何让考马斯亮蓝特异性的显色细胞骨架呢？ 曲拉通来啦（以下是我收集到的大家的答案） ① 蛋白提取过程中，起到将膜蛋白从细胞膜上解离下来的作用 ② 对蛋白质的变性作用较小，作用温和，但是能溶解脂质，所以可以除去膜系统， 留下细胞骨架蛋白和其它大部分的蛋白质。 ③ 适当浓度的TritonX100处理细胞时,因其非离子型表面活性剂的特性,已经除去 可溶性蛋白质和脂类,而微丝束属不可溶性蛋白，就不会被TritonX-100破坏而保留 ④ 能溶解脂质，去除膜系统，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶掉， ⑤ 曲拉通是一种非离子表面活性剂，能与生物膜中的磷脂等脂质结合形成可溶性 复合物，疏水端也能与膜蛋白的疏水区结合形成复合物，溶解于溶液中，将膜蛋 白从细胞膜上解离下来， ⑥ 细胞骨架在用非离子去垢剂处理时会保持非溶解状态。 ① 将膜蛋白从细胞膜上解离下来：很好，细胞膜骨架没有了。 ② 能溶解脂质：很好，增加了细胞膜的通透性 ③ 曲拉通温和，留下细胞骨架蛋白和其它大部分的蛋白质：这是个坑，如果大部分 蛋白质都留下了，还用曲拉通有何用？ ③ 适当浓度的TritonX100处理细胞时, 微丝束属不可溶性蛋白，就不会被TritonX- 100破坏而保留：请注意“适当浓度”，弦外之音，如果浓度不当，细胞骨架也会 没了。 ④ 去除膜系统，并与大部分非骨架蛋白疏水区结合而将其溶掉：骨架蛋白的疏水区 呢？其实一样可以结合。 ⑤ 细胞骨架在用非离子去垢剂处理时会保持非溶解状态。：请注意，是“保持”非 溶解状态，说明细胞骨架没有改变状态而已