四川农业大学：农学院《生物技术大实验》课程实验教学大纲

生物技术大实验课程实验教学大纲课程名称：生物技术大实验实验总学时：72实验类别：专业开课实验室名称：2教207适用专业：生物技术专业、植物科学专业开课学院：农学院开课学期：6一、实验课程简介以生物技术为理论基础，涵盖了细胞工程、发酵工程、酶工程、基因工程等主要内容。本课程共10个实验，分别从植物细胞工程实验技术、微生物工程实验技术、蛋白质与核酸的提取分离、色谱及电泳技术、PCR反应、分子杂交技术、基因重组及基因文库的构建这几大方面来构建的知识构架，通过综合实验的训练来强化学生们对生物技术的理解与认识。二、实验课性质、自的及任务1.性质：生物技术专业必修、植物科学专业选修（必修/选修）2.自的：通过该课程的学习，使学生受到严格的基因工程和分子生物学等技术实验技能的训练熟悉现代生物技术仪器的基本操作使用和使用范围，加深对生物技术系列相关课程基本理论、基本技术原理的理解认识。3.任务：在培养学生掌握实验的基本操作、基本技能和基本知识的同时，进一步培养学生分析问题和解决问题的能力，培养学生的创新意识、创新精神和创新能力，为学生将来从事科研、教学和企事业单位的分析检验以及新技术的研发工作打下坚实的基础。三、实验教学基本要求1.本课程是在生物化学实验、微生物学实验、分子生物学实验、遗传学实验之后而独立开设的实验课程。学习本课程必须具备生物化学、微生物学、分子生物学、遗传学等的基本知识和基本的实验技能。2.通过本课程的学习，使得学生系统学习和掌握生物技术实验（主要包括基因工程、蛋白工程等）的基本原理和技术。3.该课程的学习为生物技术专业学生的生产实践、课程论文和毕业论文打下必要的基础。四、实验项目、实验内容及学时分配情况每组序号实验项目名称主要内容提要学时类型人数4植物DNA的提8四个品种马铃薯叶片采用CTAB法提取c取、电泳检测和DNA，采用分光光度计进行浓度测定RAPD分子标记已晾脂糖凝胶电泳检测完整性和采用30对检测RAPD引物检测多态性。42 植物蛋白提取任意植物的叶片采用改良丙酮法提取总8c浓度测定及聚丙蛋白，采用分光光度计进行浓度测定，烯酰胺凝胶电泳采用丙烯酰胺凝胶电泳检测条带的完整检测性和分子量。483植物RNA的提任意植物的叶片采用改良的CTAB法提取C取、电泳检测和RNA，采用分光光度计进行浓度测定、RT-PCR琼脂糖凝胶电泳检测完整性和采用逆转录试剂盒进行反转录。8A4根瘤农杆菌感受含有目的基因根瘤农杆菌EH105培养、C态的制备、转基转接、浓度测定和感受态的制备。烟草因烟草的转染无菌苗培养、与农杆菌共培养和得到转和检基因苗后PCR检测。测

生物技术大实验课程实验教学大纲 课程名称：生物技术大实验 实验总学时： 72 实验类别：专业 开课实验室名称：2教207 适用专业：生物技术专业、植物科学专业 开课学院：农学院 开课学期：6 一、实验课程简介 以生物技术为理论基础，涵盖了细胞工程、发酵工程、酶工程、基因工程等主要内容。本课程共 10个实验，分别从植物细胞工程实验技术、微生物工程实验技术、蛋白质与核酸的提取分离、色谱 及电泳技术、PCR反应、分子杂交技术、基因重组及基因文库的构建这几大方面来构建的知识构架， 通过综合实验的训练来强化学生们对生物技术的理解与认识。 二、实验课性质、目的及任务 1.性质：生物技术专业必修、植物科学专业选修（必修/选修） 2.目的：通过该课程的学习，使学生受到严格的基因工程和分子生物学等技术实验技能的训练， 熟悉现代生物技术仪器的基本操作使用和使用范围，加深对生物技术系列相关课程基本理论、基本 技术原理的理解认识。 3.任务：在培养学生掌握实验的基本操作、基本技能和基本知识的同时，进一步培养学生分析问 题和解决问题的能力，培养学生的创新意识、创新精神和创新能力，为学生将来从事科研、教学和 企事业单位的分析检验以及新技术的研发工作打下坚实的基础。 三、实验教学基本要求 1. 本课程是在生物化学实验、微生物学实验、分子生物学实验、遗传学实验之后而独立开设的 实验课程。学习本课程必须具备生物化学、微生物学、分子生物学、遗传学等的基本知识和基本的 实验技能。 2. 通过本课程的学习，使得学生系统学习和掌握生物技术实验（主要包括基因工程、蛋白工程 等）的基本原理和技术。 3. 该课程的学习为生物技术专业学生的生产实践、课程论文和毕业论文打下必要的基础。 四、实验项目、实验内容及学时分配情况 序号 实验项目名称 主要内容提要 学时 类型 每组 人数 1 植物DNA的提 取、电泳检测和 RAPD分子标记 检测 四个品种马铃薯叶片采用CTAB法提取 DNA，采用分光光度计进行浓度测定、 琼脂糖凝胶电泳检测完整性和采用30对 RAPD引物检测多态性。 8 c 4 2 植物蛋白提取、 浓度测定及聚丙 烯酰胺凝胶电泳 检测 任意植物的叶片采用改良丙酮法提取总 蛋白，采用分光光度计进行浓度测定， 采用丙烯酰胺凝胶电泳检测条带的完整 性和分子量。 8 c 4 3 植物RNA的提 取、电泳检测和 RT-PCR 任意植物的叶片采用改良的CTAB法提取 RNA，采用分光光度计进行浓度测定、 琼脂糖凝胶电泳检测完整性和采用逆转 录试剂盒进行反转录。 8 c 4 4 根瘤农杆菌感受 态的制备、转基 因烟草的转染 和检 测 含有目的基因根瘤农杆菌EH105培养、 转接、浓度测定和感受态的制备。烟草 无菌苗培养、与农杆菌共培养和得到转 基因苗后PCR检测。 8 c 4

485目的基因的获采用PCR的方法获得目的基因，采用c得、载体连接和DNA回收试剂盒回收DNA，连接T载体，大肠杆菌转化制备大肠杆菌感受态和转化。486大肠杆菌阳性克采用PCR的方法鉴定含有目的基因阳性c隆鉴定和质粒克隆，对含有阳性克隆的大肠杆菌进行DNA的提取及质粒DNA的提取，琼脂糖凝胶电泳检测电泳检测其完整性和浓度。84TaqDNA聚合酶含有外源TagDNA聚合酶基因大肠杆菌7c提取及活性检测间BL21培养、转接、诱导蛋白和目的蛋白的提取及用PCR检测该酶活性。48果胶提取及柠檬柠檬或柑橘皮的预处理、酸解、脱色、4c味果冻制备沉淀和烘干，计算得率和果冻制备。449植物原生质体提烟草叶片原生质体提取和在普通光学显c取及观察微镜下观察原生质体完整性及得率。d410综合实验8各小组根据实验设计的不同而内容各异说明：1.类型：演示性、验证性、综合性、设计或创新性。a.演示性实验：指为便于学生对客观事物的认识，以直观演示的形式，使学生了解其事物的形态结构和相互关系、变化过程及其规律的教学过程。b.验证性实验：以加深学生对所学知识的理解，掌握实验方法与技能为自的，验证课堂所讲某原理、理论或结论，以学生为具体实验操作主体，通过现象衍变观察、数据记录、计算、分析直-至得出被验证的原理、理论或结论的实验过程，C.综合性实验：是指实验内容涉及本课程的综合知识或与本课程相关课程知识的实验d.设计或创新性实验：是指给定实验目的、要求和实验条件，由学生自行设计实验方案并加以实现的实验。2.每组人数：指分组实验时每组学生人数，原则上每组人数不应超过5人。五、实验成绩考核办法考勤20%，实验报告30%，笔试成绩50%六、实验指导书和参考书教材名称、作者（译者）、出版社、出版时间生物技术综合实验教程、梁红、化学工业出版社、2010.1大纲执笔人：李立芹大纲审定人：黄云

5 目的基因的获 得、载体连接和 大肠杆菌转化 采用PCR的方法获得目的基因，采用 DNA回收试剂盒回收DNA, 连接T载体， 制备大肠杆菌感受态和转化。 8 c 4 6 大肠杆菌阳性克 隆鉴定和质粒 DNA的提取及 电泳检测 采用PCR的方法鉴定含有目的基因阳性 克隆，对含有阳性克隆的大肠杆菌进行 质粒DNA的提取，琼脂糖凝胶电泳检测 其完整性和浓度。 8 c 4 7 TaqDNA聚合酶 提取及活性检测 含有外源TaqDNA聚合酶基因大肠杆菌 BL21培养、转接、诱导蛋白和目的蛋白 的提取及用PCR检测该酶活性。 8 c 4 8 果胶提取及柠檬 味果冻制备 柠檬或柑橘皮的预处理、酸解、脱色、 沉淀和烘干，计算得率和果冻制备。 4 c 4 9 植物原生质体提 取及观察 烟草叶片原生质体提取和在普通光学显 微镜下观察原生质体完整性及得率。 4 c 4 10 综合实验 各小组根据实验设计的不同而内容各异 8 d 4 说明： 1.类型：演示性、验证性、综合性、设计或创新性。 a. 演示性实验：指为便于学生对客观事物的认识，以直观演示的形式，使学生了解其事物的形 态结构和相互关系、变化过程及其规律的教学过程。 b. 验证性实验：以加深学生对所学知识的理解，掌握实验方法与技能为目的，验证课堂所讲某 一原理、理论或结论，以学生为具体实验操作主体，通过现象衍变观察、数据记录、计算、分析直 至得出被验证的原理、理论或结论的实验过程。 c. 综合性实验：是指实验内容涉及本课程的综合知识或与本课程相关课程知识的实验。 d. 设计或创新性实验：是指给定实验目的、要求和实验条件，由学生自行设计实验方案并加以 实现的实验。 2.每组人数：指分组实验时每组学生人数，原则上每组人数不应超过5人。 五、实验成绩考核办法 考勤20%， 实验报告30%，笔试成绩50% 六、实验指导书和参考书 教材名称、作者（译者）、出版社、出版时间 生物技术综合实验教程、梁红、化学工业出版社、2010.1 大纲执笔人：李立芹                      大纲审定人：黄 云