山东农业大学：《基因工程综合实验1》课程教学大纲

《基因工程综合实验1》教学大纲学分：2课程代码：BB061305学时：36课程性质：必修适用专业：生物技术，生物科学执笔人：朱常香审定人：郑成超一、实验课的性质与任务本课程是一门专业实验课。该课程以植物基因工程的研究程序为主线，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建等方面的实验内容，在注重专业性和可操作性的前提下突出先进性和系统性，加强教学内容的选择性。通过本课程的学习和实践，使学生对基因工程的全过程有系统、明确的认识，达到熟识、理解并掌握DNA重组实验原理和操作方法，提高分析问题和解决问题的能力，开拓创新能力，为从事生物技术及其相关领域的科学研究工作打下基础。二、实验目的与要求本课程的目的是培养高年级本科生及研究生进行基因操作的能力。教学中，要求调动教学双方的主观能动性，组织学生参加实验准备，让学生和教师共同讨论理论和实验问题，指导学生分析总结实验结果，学会正确书写科学报告（论文）。三、实验项目及内容提要基因工程综合实验1（061305）实验类型序实验名称学时必开选开内容提要基本综合设计验证号操作Trizo1法提取感染病毒感染病毒的植的烟草叶片的总RNA，甲/物总RNA提取8V醛变性凝胶电泳检测及检测设计引物，RT-PCR扩增RT-PCR克隆4目的基因目的基因PCR扩增产物、载体，用基因克降及载限制性内切酶酶切、回6体构建经餐T4DNA连接酶连实验试剂的准备，利用大肠杆菌感受76Cohen方法制备大肠杆菌态的制备DH5感受态用热击法将质粒DNA转入质粒DNA向大大肠杆菌中，筛选阳性b6V肠杆菌中转化克隆质粒DNA的微用小量法提取质粒DNA，量提取及酶切6J16酶切后，电泳验证。鉴定四、实验报告的格式实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸。实验报告的内容应包括：实验目的、实验的基本原理、实验用的仪器设备及试剂、实验操作程序、实验结果与分析、实验应注意事项及问题讨论。五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法考核及成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据实验报告撰写情况及平时表现给予综合评定。六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数仪器设备名称台（套）数2电泳仪2电泳槽6旋涡混合器全温震荡培养箱1磁力搅拌器6液氮氨罐1pHit1冰箱11超低温冰柜1分光光度计万分之一天平1百分之一天平1

《基因工程综合实验1》教学大纲 课程代码：BB061305 学时：36 学分：2 适用专业：生物技术，生物科学 课程性质：必修 执笔人：朱常香 审定人：郑成超 一、实验课的性质与任务 本课程是一门专业实验课。该课程以植物基因工程的研究程序为主线，综合了目的基因的分离、克隆，载体的构建等方面的实验内容，在 注重专业性和可操作性的前提下突出先进性和系统性，加强教学内容的选择性。通过本课程的学习和实践，使学生对基因工程的全过程有系 统、明确的认识，达到熟识、理解并掌握DNA重组实验原理和操作方法，提高分析问题和解决问题的能力，开拓创新能力，为从事生物技术及 其相关领域的科学研究工作打下基础。 二、实验目的与要求 本课程的目的是培养高年级本科生及研究生进行基因操作的能力。教学中，要求调动教学双方的主观能动性，组织学生参加实验准备，让 学生和教师共同讨论理论和实验问题，指导学生分析总结实验结果，学会正确书写科学报告（论文）。 三、实验项目及内容提要 基因工程综合实验1（061305） 序 号 实验名称 学时 必开 选开 实验类型 验证 基本 内容提要 操作 综合 设计 1 感染病毒的植 物总RNA提取 及检测 8 √ √ Trizol法提取感染病毒 的烟草叶片的总RNA，甲 醛变性凝胶电泳检测 2 RT-PCR克隆 目的基因 4 √ 设计引物，RT-PCR扩增 目的基因 3 基因克隆及载 体构建 6 √ √ PCR扩增产物、载体，用 限制性内切酶酶切、回 收，T4 DNA连接酶连 接。 4 大肠杆菌感受 态的制备 6 √ √ 实验试剂的准备，利用 Cohen方法制备大肠杆菌 DH5感受态细胞 5 质粒DNA向大 肠杆菌中转化 6 √ 用热击法将质粒DNA转入 大肠杆菌中，筛选阳性 克隆 6 质粒DNA的微 量提取及酶切 鉴定 6 √ √ 用小量法提取质粒DNA， 酶切后，电泳验证。 四、实验报告的格式 实验报告的撰写要求使用专用实验报告纸。实验报告的内容应包括：实验目的、实验的基本原理、实验用的仪器设备及试剂、实验操作程 序、实验结果与分析、实验应注意事项及问题讨论。 五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法 考核及成绩评定把学生的实际动手能力放在重要地位。根据实验报告撰写情况及平时表现给予综合评定。 六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数 仪器设备名称 台（套）数 电泳仪 2 电泳槽 2 旋涡混合器 6 全温震荡培养箱 1 磁力搅拌器 6 液氮罐 1 pH计 1 冰箱 1 超低温冰柜 1 分光光度计 1 万分之一天平 1 百分之一天平 1

1低温高速冷冻离心机6普通离心机6超静工作台微量移液器12套（1000ul/200ul\20ul）PCR仪1微波炉13水浴锅1恒温水浴锅1制冰机高压灭菌锅1附：教学参考书目1、使用实验指导《基因工程综合实验》操作手册。朱常香，宋云枝等，2003。2、参考书目（1）《分子克隆实验指南》（第三版）。J·萨姆布鲁克，D·W·拉塞尔著，黄培堂等译。科学出版社，2002。《基因工程原理与技术》。王关林，方宏笃主编，科学出版社，1998。(2)

低温高速冷冻离心机 1 普通离心机 6 超静工作台 6 微量移液器 12套（1000ul\200ul\20ul） PCR仪 1 微波炉 1 水浴锅 3 恒温水浴锅 1 制冰机 1 高压灭菌锅 1 附：教学参考书目 1、使用实验指导《基因工程综合实验》操作手册。朱常香，宋云枝等，2003。 2、参考书目 （1）《分子克隆实验指南》（第三版）。J·萨姆布鲁克，D·W·拉塞尔著，黄培堂等译。科学出版社，2002。 （2）《基因工程原理与技术》。王关林，方宏筠主编，科学出版社，1998