山东师范大学：《微生物工程》课程教学资源（PPT课件）实验二 淀粉酶产生菌的紫外线诱变育种

大实验二 淀粉酶产生菌的紫外线诱变育种

大实验二 淀粉酶产生菌的紫外线诱变育种

1、掌握紫外线诱变育种的原理和方法步骤 2、了解淀粉酶活力测定方法 实验目的要求

1、掌握紫外线诱变育种的原理和方法步骤 2、了解淀粉酶活力测定方法 实验目的要求

实 验 原 理

实 验 原 理

实 验 步 骤 分三阶段进行: 诱变处理 观察诱变效应、 接种、培养  -淀粉酶活力 测定

实 验 步 骤 分三阶段进行: 诱变处理 观察诱变效应、 接种、培养  -淀粉酶活力 测定

第一部分 诱变处理 1） 制备菌（芽孢）悬液； 2） 显微镜直接计数，调整细胞（芽孢）浓度至约108 /ml/； 3） 倒平板（牛肉膏蛋白胨；每组12套）； 4） 紫外线处理（3ml，直径6cm平皿，1～5min）； 5） 稀释（至10－5）； 实验步骤 (continued)

第一部分 诱变处理 1） 制备菌（芽孢）悬液； 2） 显微镜直接计数，调整细胞（芽孢）浓度至约108 /ml/； 3） 倒平板（牛肉膏蛋白胨；每组12套）； 4） 紫外线处理（3ml，直径6cm平皿，1～5min）； 5） 稀释（至10－5）； 实验步骤 (continued)

实验步骤 (continued) 6) 涂平板（取后3个稀释度，每稀释度2皿，每皿加菌 液100ul）； 注意： 4）～6）在暗室红灯下进行 7) 培养：平板倒置装于遮光袋，放置于37℃培养48小时； 8) 采用5）～6）步同样方法稀释未经照射的菌液，并涂 平板（6个），37℃培养48小时

实验步骤 (continued) 6) 涂平板（取后3个稀释度，每稀释度2皿，每皿加菌 液100ul）； 注意： 4）～6）在暗室红灯下进行 7) 培养：平板倒置装于遮光袋，放置于37℃培养48小时； 8) 采用5）～6）步同样方法稀释未经照射的菌液，并涂 平板（6个），37℃培养48小时

两天后进行第二阶段工作

两天后进行第二阶段工作

实验步骤 (continued) 第二部分： 观察诱变效应、接种、摇瓶培养 11）接种、培养： 选取诱变组透明圈直径和菌落直径比值较大的菌落（菌 株）3个，分别接种牛肉膏蛋白胨液体培养基（每株接1 瓶），37℃，160rpm，培养2～3天。 9）分别计数诱变组和对照组平板上菌落数，并计算致死率； 10）观察诱变效应： 加入碘液，分别测量诱变组和对照组10～20个菌落的透明 圈直径和菌落直径，并计算比值，求平均数；将诱变组和对 照组数据作比较

实验步骤 (continued) 第二部分： 观察诱变效应、接种、摇瓶培养 11）接种、培养： 选取诱变组透明圈直径和菌落直径比值较大的菌落（菌 株）3个，分别接种牛肉膏蛋白胨液体培养基（每株接1 瓶），37℃，160rpm，培养2～3天。 9）分别计数诱变组和对照组平板上菌落数，并计算致死率； 10）观察诱变效应： 加入碘液，分别测量诱变组和对照组10～20个菌落的透明 圈直径和菌落直径，并计算比值，求平均数；将诱变组和对 照组数据作比较

实验步骤 (continued) 第三部分 α-淀粉酶活力测定（部颁标准） 1、原理 α-淀粉酶能将淀粉分子键的α-1，4葡萄糖苷键任意切断 成长短不一的短链糊精，以及少量麦芽糖和葡萄糖，而使 淀粉对碘呈蓝紫色特异反应逐渐消失，以该颜色消失的速 度计算酶的活力

实验步骤 (continued) 第三部分 α-淀粉酶活力测定（部颁标准） 1、原理 α-淀粉酶能将淀粉分子键的α-1，4葡萄糖苷键任意切断 成长短不一的短链糊精，以及少量麦芽糖和葡萄糖，而使 淀粉对碘呈蓝紫色特异反应逐渐消失，以该颜色消失的速 度计算酶的活力

实验步骤 (continued) 2、试剂 1、原碘液 称取碘5.5g，碘化钾11g，先用少量蒸馏水 使碘完全溶解后定容至250ml，贮存于棕色瓶中。 2、稀碘液 取原碘液1ml，加入碘化钾10g，用蒸馏水溶解 定容至225ml，贮于棕色瓶中。 3、2%可溶性淀粉 精确称取2g可溶性淀粉（以绝干计）， 然后用少量蒸馏水调匀，徐徐倾于煮沸的蒸馏水中，加热煮 沸至透明为止，冷却定容至100ml。（注意：此溶液需当天 配置）

实验步骤 (continued) 2、试剂 1、原碘液 称取碘5.5g，碘化钾11g，先用少量蒸馏水 使碘完全溶解后定容至250ml，贮存于棕色瓶中。 2、稀碘液 取原碘液1ml，加入碘化钾10g，用蒸馏水溶解 定容至225ml，贮于棕色瓶中。 3、2%可溶性淀粉 精确称取2g可溶性淀粉（以绝干计）， 然后用少量蒸馏水调匀，徐徐倾于煮沸的蒸馏水中，加热煮 沸至透明为止，冷却定容至100ml。（注意：此溶液需当天 配置）