山东师范大学：《微生物工程》课程教学资源（PPT课件）实验四 苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）摇瓶发酵

大实验四 苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis） 摇瓶发酵

大实验四 苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis） 摇瓶发酵

1、了解苏云金芽孢杆菌的基本特性和应用价值， 学习掌握苏云金杆菌液体发酵的基本工艺过程。 2、研究培养基成分、配比以及通气状况对苏云 金杆菌芽孢形成和最终芽孢数的影响。 实验目的要求

1、了解苏云金芽孢杆菌的基本特性和应用价值， 学习掌握苏云金杆菌液体发酵的基本工艺过程。 2、研究培养基成分、配比以及通气状况对苏云 金杆菌芽孢形成和最终芽孢数的影响。 实验目的要求

实 验 原 理

实 验 原 理

实 验 步 骤 1、按拟定方案中的配方配制培养基： 每组3瓶；8层纱布包扎；1kg/cm2灭菌25min。 2、接种： 按3%比例接入对数期菌种悬液（已备好，LB培养）。 3、培养： 按拟定方案中的温度、振荡频率进行培养

实 验 步 骤 1、按拟定方案中的配方配制培养基： 每组3瓶；8层纱布包扎；1kg/cm2灭菌25min。 2、接种： 按3%比例接入对数期菌种悬液（已备好，LB培养）。 3、培养： 按拟定方案中的温度、振荡频率进行培养

实验步骤 (continued) 4、检查： 接种12h后，每隔2h，无菌操作取少许发酵液直接镜检 或染色后镜检，判断芽孢是否形成、整齐度、比率，确 定发酵终点（芽孢达80%以上）

实验步骤 (continued) 4、检查： 接种12h后，每隔2h，无菌操作取少许发酵液直接镜检 或染色后镜检，判断芽孢是否形成、整齐度、比率，确 定发酵终点（芽孢达80%以上）

实验步骤 (continued) 5、发酵液芽孢数测定： 1）倒LB平板 每组18平板 2）发酵液系列稀释 3）取3个稀释度涂平板，每稀释度2平板，每平板加 液100ul。 4）37℃培养24h，计数菌落数，计算发酵液芽孢数。 （可考虑加热杀死营养体细胞

实验步骤 (continued) 5、发酵液芽孢数测定： 1）倒LB平板 每组18平板 2）发酵液系列稀释 3）取3个稀释度涂平板，每稀释度2平板，每平板加 液100ul。 4）37℃培养24h，计数菌落数，计算发酵液芽孢数。 （可考虑加热杀死营养体细胞

实验结果  

实验结果  

实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题

实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题

准 备： 1、牛肉膏蛋白胨固体培养基: （Lab-616） 1500ml; 分装250ml三角瓶，每瓶180ml，共8瓶 2、稀释用无菌水: (Lab-619) 150支试管，每管加dH2O 4.5ml

准 备： 1、牛肉膏蛋白胨固体培养基: （Lab-616） 1500ml; 分装250ml三角瓶，每瓶180ml，共8瓶 2、稀释用无菌水: (Lab-619) 150支试管，每管加dH2O 4.5ml