山东师范大学：《微生物工程》课程教学资源（PPT课件）实验一 从土壤中分离纯化蛋白酶产生菌

大实验一 从土壤中分离纯化蛋白酶产生菌

大实验一 从土壤中分离纯化蛋白酶产生菌

1、掌握菌株分离纯化的基本原理和方法 2、分离获得并纯化蛋白酶产生菌 实验目的要求

1、掌握菌株分离纯化的基本原理和方法 2、分离获得并纯化蛋白酶产生菌 实验目的要求

实 验 原 理

实 验 原 理

实 验 步 骤 土样 5g 45ml dH2O 玻璃珠 振摇15min 各0.5ml 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 4.5ml 各100 ul 配制 酪蛋白培养基 （150 ml / 瓶） (各2套) 涂平板 划线纯化 （每人1平板） (37℃，24～48h) 接种斜面 37℃培养24～48h 37℃培养24～48h；4℃冰箱保存菌种

实 验 步 骤 土样 5g 45ml dH2O 玻璃珠 振摇15min 各0.5ml 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 4.5ml 各100 ul 配制 酪蛋白培养基 （150 ml / 瓶） (各2套) 涂平板 划线纯化 （每人1平板） (37℃，24～48h) 接种斜面 37℃培养24～48h 37℃培养24～48h；4℃冰箱保存菌种

实验结果  可直接观察平板上有无 具透明圈的菌落  如透明圈不清晰，可向 平板内菌落间加入少许10% 三氯醋酸，过片刻再观察

实验结果  可直接观察平板上有无 具透明圈的菌落  如透明圈不清晰，可向 平板内菌落间加入少许10% 三氯醋酸，过片刻再观察

实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题 1） 为分离获得产蛋白酶的细菌，应从何种环 境取样？ 2）如要分离淀粉酶产生菌，应如何设计培养 基？怎样识别目标菌？从何种环境取样？

实验报告 1、实验原理、方法步骤、结果及分析 2、思考题 1） 为分离获得产蛋白酶的细菌，应从何种环 境取样？ 2）如要分离淀粉酶产生菌，应如何设计培养 基？怎样识别目标菌？从何种环境取样？

1、酪蛋白培养基（1200ml; 150ml/bottle; 8瓶） ( 616-L1 & 616-R1) 2、牛肉膏蛋白胨斜面（300ml;分装50支） ( 616-L2 & 616-R2) 3、稀释用灭菌水 （4.5mldH2O /管，5×8= 40支） ( 619-L1 & 619-R1) 4、制备土壤悬液用水（45mldH2O，玻璃珠; 8瓶） ( 619-L2 & 619-R2) 准 备：

1、酪蛋白培养基（1200ml; 150ml/bottle; 8瓶） ( 616-L1 & 616-R1) 2、牛肉膏蛋白胨斜面（300ml;分装50支） ( 616-L2 & 616-R2) 3、稀释用灭菌水 （4.5mldH2O /管，5×8= 40支） ( 619-L1 & 619-R1) 4、制备土壤悬液用水（45mldH2O，玻璃珠; 8瓶） ( 619-L2 & 619-R2) 准 备：

1、酪蛋白培养基: 酪素5g （先用0.2N的NaOH充分溶解），牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，pH7.0～7.5， H2 O 1000ml,琼脂粉15.0g 2、牛肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g， H2 O 1000ml，pH值7.0,琼脂粉15g 培 养 基 配 方：

1、酪蛋白培养基: 酪素5g （先用0.2N的NaOH充分溶解），牛肉膏 3.0g，蛋白胨 10.0g，NaCl 10.0g，pH7.0～7.5， H2 O 1000ml,琼脂粉15.0g 2、牛肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 10.0g， H2 O 1000ml，pH值7.0,琼脂粉15g 培 养 基 配 方：

1）稀释用水：4.5ml dH2O/管，50管 ( 616-L1 & 616-R1) 2）淀粉培养基（固体）：每瓶250ml，4瓶 ( 619-L1 & 619-R1) 3）牛肉膏蛋白胨（液体）：500ml三角瓶装80ml，12瓶 ( 619-L2 & 619-R2) 4）卢戈氏碘液：300ml ( 616-L2 & 616-R2) 在大实验的第2次实验时准备（下个实验用）：

1）稀释用水：4.5ml dH2O/管，50管 ( 616-L1 & 616-R1) 2）淀粉培养基（固体）：每瓶250ml，4瓶 ( 619-L1 & 619-R1) 3）牛肉膏蛋白胨（液体）：500ml三角瓶装80ml，12瓶 ( 619-L2 & 619-R2) 4）卢戈氏碘液：300ml ( 616-L2 & 616-R2) 在大实验的第2次实验时准备（下个实验用）：

1、淀粉培养基： 蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，H2 O 1000ml， pH7.2；琼脂15g 2、牛肉膏蛋白胨液体培养基：配方见上，不加琼脂 3、卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，H2 O 300ml 配法：先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解在碘 化钾溶液中，待碘完全溶解后加足水即可 附 配 方 ：

1、淀粉培养基： 蛋白胨10g，NaCl 5g，牛肉膏5g，可溶性淀粉2g，H2 O 1000ml， pH7.2；琼脂15g 2、牛肉膏蛋白胨液体培养基：配方见上，不加琼脂 3、卢戈氏碘液：碘1g，碘化钾2g，H2 O 300ml 配法：先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解在碘 化钾溶液中，待碘完全溶解后加足水即可 附 配 方 ：