《生物化学与分子生物学》课程教学课件（实验讲稿）实验技术概论

生物化学与分子生物O学实验技术概论李嘉欣生化与分生教研室

生物化学与分子生物 学实验技术概论 生化与分生教研室￾￾李嘉欣

概论克【掌握】S1.常用生物化学与分子生物学实验方法（分光光度法、层析法、电泳法离心法）的原理和应用：常用生物化学与分子生物学仪器设备的基本操作（分光光度计、吸量管、微量移液器、离心机）。2.组织样本的制备。【熟悉】1.常用生物化学与分子生物学实验的仪器设备（超净工作台、紫外分析仪、制冰机、摇床、恒温水浴、细菌培养箱、电泳仪及电泳槽）2.玻璃仪器的洗涤方法【了解】1.实验室规则2.实验记录及实验报告3.课程性质及考核办法

【掌握】 1.常用生物化学与分子生物学实验方法（分光光度法、层析法、电泳法、 离心法）的原理和应用；常用生物化学与分子生物学仪器设备的基本操 作（分光光度计、吸量管、微量移液器、离心机）。 2.组织样本的制备。 【熟悉】 1.常用生物化学与分子生物学实验的仪器设备（超净工作台、紫外分析 仪、制冰机、摇床、恒温水浴、细菌培养箱、电泳仪及电泳槽） 2.￾玻璃仪器的洗涤方法 【了解】 1.实验室规则 2.实验记录及实验报告 3.课程性质及考核办法 概￾￾￾￾￾￾￾论

实验室规则S1，每次实验课穿好白大衣，带上学生证。S2.提前5分钟进入教室，避免迟到。3．实验前，观察台上试剂瓶和仪器摆放位置，实验后试8剂瓶和仪器放回原位。4.实验结束，所领仪器必须用洗衣粉刷干净再退还，如有损坏，需自行付费赔偿。5.水池中严禁丢纸类，塑料类垃圾6.每次课后留3-5名学生打扫实验室卫生，包括窗台，地面，台面。O7如有事情不能来，需提前请假通知，老师为其安排其他时间补实验。如不能完成实验，按零分处理8，实验考试成绩：总分100，其中课堂表现及作业30-40,实验技术考试10-20，理论考试50

§ 1.￾每次实验课穿好白大衣，带上学生证。 § 2.￾提前5分钟进入教室，避免迟到。 § 3.￾实验前，观察台上试剂瓶和仪器摆放位置，实验后试 剂瓶和仪器放回原位。 § 4.￾实验结束，所领仪器必须用洗衣粉刷干净再退还，如 有损坏，需自行付费赔偿。 § 5.水池中严禁丢纸类，塑料类垃圾。 § 6.每次课后留3-5名学生打扫实验室卫生，包括窗台，地 面，台面。 § 7.￾如有事情不能来，需提前请假通知，老师为其安排其 他时间补实验。如不能完成实验，按零分处理。 § 8.￾实验考试成绩：总分100，其中课堂表现及作业30- 40， 实验技术考试10-20，理论考试50。 实 验 室 规 则

实验报告实验名称、时间、地点、同组人员实验目的实验原理仪器及试剂花--花实验步骤葱实验结果结果分析与讨论

实验报告 实验名称、时间、地点、同组人员 实验目的 实验原理 仪器及试剂 实验步骤 实验结果 结果分析与讨论

第一节常用生物化学与分子生物学实验方法一、分光光度法（Spectrophotography）是利用有色物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术一一德-德

一、分光光度法（Spectrophotography） ￾￾￾￾￾￾是利用有色物质所特有的吸收光谱来鉴别 物质或测定其含量的一项技术。 第一节 常用生物化学与分子生物学实验方法

基本原理1①朗伯-比尔定律（Lambert-Beer’s Law）（又称吸收定律)：当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收层厚度L成正比。A=ECLA为吸光度，E为摩尔吸光系数，C为吸光物质浓度，L为吸光溶液的厚度

Ø朗伯-比尔定律(Lambert-Beer’s Law)(又称吸收定 律)： 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的 吸光物质时，其吸光度A与吸光物质的浓度C及吸收 层厚度L成正比。 ￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾ A=εCL A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，C为吸光物质浓度，L 为吸光溶液的厚度。 （一）基本原理

(二）分光光度法的应用1、定量分析D标准曲线法①标准对照法秘釉①标准系数法--花-0回归分析法

（二）分光光度法的应用 Ø标准曲线法 Ø标准对照法 Ø标准系数法 Ø回归分析法 1、定量分析

①标准曲线法：测出配制一系列浓度由小到大的标准溶液，它们的吸光度。以各标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，在方格坐标纸上绘出的曲线，即标准稻曲线。相同条件测出待测样品的吸光度后，从标准曲线上可以直接查出其浓度。例：蛋白质定量实验

①标准曲线法： 配制一系列浓度由小到大的标准溶液，测出 它们的吸光度。以各标准溶液的浓度为横坐标，相应的 吸光度为纵坐标，在方格坐标纸上绘出的曲线，即标准 曲线。 相同条件测出待测样品的吸光度后，从标准曲 线上可以直接查出其浓度。 例：蛋白质定量实验

吉②标准比较法：在相同条件下，配制标准溶液和待测样品溶液，测定它们的吸光度。比较两者的吸光度，即可求出待测样品溶液的浓度C待测=C标准XA待测/A标准③标准系数法：标准系数A-&CL(&L)多次测量标准液后，求取A,再求标准系数福待测液浓度二待测液吸光度X标准系数

￾②标准比较法： ￾￾￾￾在相同条件下，配制标准溶液和待测样品溶液，测定它们 的吸光度。比较两者的吸光度，即可求出待测样品溶液的浓度。 ③标准系数法： A=εC L 多次测量标准液后，求取A，再求标准系数 待测液浓度=待测液吸光度×标准系数 (ε L) 1 标准系数 C待测=C标准×A待测/A标准

克④回归分析法3与其相应的吸光度，用回归将制作标准曲线的各种标准液浓度，将样品分析法求出一个回归方程式。以后，只要测定条件不变，液吸光度值代入该方程式，则可计算出样品液的浓度。12吸光值100o回归方程y=ax+b德-一德6a202121046810浓度

④￾回归分析法 将制作标准曲线的各种标准液浓度，与其相应的吸光度，用回归 分析法求出一个回归方程式。以后，只要测定条件不变，将样品 液吸光度值代入该方程式，则可计算出样品液的浓度。 吸光值 吸 光 值 回归方程 y=ax+b ￾￾￾￾￾￾浓度