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《生物化学与分子生物学》课程教学课件(实验讲稿)血浆清蛋白分离、纯化与鉴定

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《生物化学与分子生物学》课程教学课件(实验讲稿)血浆清蛋白分离、纯化与鉴定
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中f日品包头医学院e生物化学与分子生物学实验课程血浆清蛋白分离、纯化与鉴定生物化学与分子生物学教研室

血浆清蛋白分离、纯化与鉴定 生物化学与分子生物学教研室

中afEan包头医学院生物化学与分子生物学实验课程实验目的掌握盐析法的基本原理及操作方法。掌握凝胶层析技术的基本原理及操作方法。掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作方法

实验目的 掌握盐析法的基本原理及操作方法。 掌握凝胶层析技术的基本原理及操作 方法。 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理和操作 方法

实验原理中aTEE包头医学Be生物化学与分子生物学实验课程一、粗分离一盐析法盐析:指向蛋白质溶液中加入某些高浓度的无机盐溶液后,使蛋白质的溶解度降低,进而使蛋白质凝聚从溶液中析出。蛋白质溶液是稳定的亲水胶体溶液维持稳定性的因素半饱和硫酸铵溶液中:血浆中球蛋白析出饱和硫酸铵溶液:球蛋水密和清蛋白都析出。离子强度改变对水分子亲和力+中性盐溶液中和表面电荷大于蛋白质,破坏水化膜蛋白质溶解度降低,分子聚集沉淀

实验原理 一、粗分离—盐析法    盐析:指向蛋白质溶液中加入某些高浓度的无机盐溶液后,使 蛋白质的溶解度降低,进而使蛋白质凝聚从溶液中析出。 蛋白质溶液是稳定的亲水胶体溶液 维持稳定性的因素 分子表面电荷 水化膜 +中性盐溶液 离子强度改变, 中和表面电荷 对水分子亲和力 大于蛋白质,破 坏水化膜 蛋白质溶解度降低,分子聚集沉淀 半饱和硫酸铵溶液中:血浆中球蛋白析出 饱和硫酸铵溶液中:球蛋白和清蛋白都析出

中aan包头医学院F生物化学与分子生物学实验课程(分子筛层析)细分离一凝胶层析二、乡按分子大小分离样品中各组分的一种物理分离方法混合物通过凝胶时,由于分子大小不同,通过凝胶柱的速度不同,得以分离。分子筛效应:移动速①小分子物质:易进入凝胶网孔,流程长、度慢。①大分子物质:沿凝胶颗粒间不能进入凝胶网孔,流动,流程短、移动快中

二、细分离—凝胶层析(分子筛层析) 分子筛效应: Ø小分子物质:易进入凝胶网孔,流程长、移动速 度慢。 Ø大分子物质:不能进入凝胶网孔,沿凝胶颗粒间 流动,流程短、移动快。 按分子大小分离样品中各组分的一种物理分离方法。 混合物通过凝胶时,由于分子大小不同,通过凝胶 柱的速度不同,得以分离

中社包头医学院eC生物化学与分子生物学实验课程(1)(3)(5)(2)(4)000000C-硫酸铵0000006oo00SGO0000OO60o0000C0000-凝胶颗粒000000ooo20000000000000000OrO多孔板清蛋白0006002CB00清蛋白硫酸铵+磺基水杨酸+奈氏试剂白色浑黄色浊沉淀

硫酸铵 清蛋白 清蛋白 硫酸铵 白色浑 浊沉淀 黄色 +磺基水杨酸 +奈氏试剂

中aEn包头医学院BF生物化学与分子生物学实验课程主要实验仪器及试剂实验仪器1.5mL塑料离心管、胶头滴管、微量加样器玻璃棒、台式高速离心机、层析柱、恒流泵、核酸蛋白检测仪、电脑。实验试剂饱和硫酸铵溶液

主要实验仪器及试剂 实验仪器 1.5 mL 塑料离心管、胶头滴管、微量加样器、 玻璃棒、台式高速离心机、 层析柱、恒流泵、 核酸蛋白检测仪、电脑。 实验试剂 饱和硫酸铵溶液

中an包头医学院B生物化学与分子生物学实验课程实验方法一.盐析:在一支1.5mL塑料离心管中加入0.5mL血浆,再加入0.5mL饱和硫酸铵溶液,边滴加边搅拌。加完后4C静置10分钟,使之充分盐析,然后以6000g离心5分钟。此时的上清液中含有清蛋白,沉淀为球蛋白

实验方法 一. 盐析:在一支1.5 mL塑料离心管中加入0.5  mL血浆,再加入0.5 mL饱和硫酸铵溶液, 边滴加边搅拌。加完后4℃静置10分钟,使 之充分盐析,然后以6000 g离心5分钟。此 时的上清液中含有清蛋白,沉淀为球蛋白

中aTEE包头医学院Be生物化学与分子生物学实验课程二 凝胶层析1.凝胶的准备葡聚糖凝胶是粉未状,使用前需要充分的溶胀。称取Sephadex G-50 1.0g,加去离子水30mL,室温溶胀3小时以上。2.层析装置的准备洗脱液HL-2恒流泵I核酸蛋白检测仪(层析图谱)

二 凝胶层析 1.凝胶的准备  葡聚糖凝胶是粉末状,使用前需要充 分的溶胀。称取Sephadex G-50  l.0 g,加去离子 水30 mL,室温溶胀3小时以上。 2.层析装置的准备

中aTEE包头医学院生物化学与分子生物学实验课程2.1装柱:a、将层析柱垂直装好在台式铁支架上,在柱内注入适量洗脱液,打开柱底端出口,洗脱液从柱底端流出并排除柱底端及连接管道中的气泡,待柱内留有约1.0cm高洗脱液时关闭柱底端出口(高或使用夹子夹紧)

2.1 装柱:         a、将层析柱垂直装好 在台式铁支架上,在柱内注 入适量洗脱液,打开柱底端 出口,洗脱液从柱底端流出 并排除柱底端及连接管道中 的气泡,待柱内留有约 1.0cm高洗脱液时关闭柱底 端出口(抬高或使用夹子夹 紧)

中afaa包头医学院生物化学与分子生物学实验课程b、将处理好的层析凝胶在烧杯中加1倍凝胶体积的洗脱液并搅成悬浮状,随后立即自柱顶部沿着贴紧柱内壁的玻璃棒,缓缓加入柱中并加满

b、将处理好的层析凝 胶在烧杯中加1倍凝胶 体积的洗脱液并搅成 悬浮状,随后立即自 柱顶部沿着贴紧柱内 壁的玻璃棒,缓缓加 入柱中并加满

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