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《生物化学与分子生物学》课程教学课件(实验讲稿)转氨基作用

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《生物化学与分子生物学》课程教学课件(实验讲稿)转氨基作用
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转氨基作用

转氨基作用

实验目的掌握纸层析的原理和操作技术熟悉动物组织的转氨基作用

实验目的 l 掌握纸层析的原理和操作技术 l 熟悉动物组织的转氨基作用

实验原理(一)车转氨基作用在转氨酶(transaminase)的作用下,某一氨基酸去掉α-氨基生成相应的α一酮酸,而另一种α一酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。RRiRR转氨酶IC=0C=0H-CNHH-CNH++COOHCOOHCOOHCOOH

实验原理 (一)转氨基作用 在 转 氨 酶 (transaminase)的 作 用下,某一氨基酸去掉α-氨基 生成相应的α-酮酸,而另一种 α-酮酸得到此氨基生成相应的 氨基酸的过程

COOHCOOHCOOHCOOHCH2CH2GOT+CH2CH2+CH 2CH2H-C-NH2C=0C=0H-C-NH2COOHCOOHCOOHCOOH谷氨酸草酰乙酸天门冬氨酸α-酮戊二酸COOHCOOHCH2CH2GPT十CH3CH3+CH2CH,H-C-NH2C=0C=0H-C-NH2COOHCOOHCOOHCOOH谷氨酸丙酮酸丙氨酸α一酮戊二酸

本实验以谷氨酸和丙酮酸钠为底物,加含有谷丙转氨酶(ALT)的肝匀浆,保温后用纸层析法检查丙氨酸的出现,以证明转氨基作用

本实验以谷氨酸和丙酮酸钠为底物,加含 有谷丙转氨酶(ALT)的肝匀浆,保温后用 纸层析法检查丙氨酸的出现,以证明转氨 基作用

(二层析技术原理」层析原理:是一种物理的分离方法,利用混合物中各组分的物理化学性质的差别,使各组分以不同程度分布在两相中,其中一相为固定相,另一相流过此相称作流动相,并使各组分以不同速度移动,从而达到分离的目的。厂可分离物质:糖类、有机酸、氨基酸、核苷酸

(二)层析技术原理 l 层析原理:是一种物理的分离方法,利用 混合物中各组分的物理化学性质的差别, 使各组分以不同程度分布在两相中,其中 一相为固定相,另一相流过此相称作流动 相,并使各组分以不同速度移动,从而达 到分离的目的。 l 可分离物质:糖类、有机酸、氨基酸、核 苷酸

层析技术分类名称操作方式固定相流动相分离依据纸层析液体液体分配层析溶解度薄层层析带电性液体固体离子交换层析离子交换柱层析静电引力固体液体吸附薄层层析吸附力吸附层析气体固体气体吸附层析酶与底物固体液体亲合层析配体专一性抗原与抗体固体液体凝胶层析凝胶过滤分子大小

层析技术分类 名称 操作方式 固定相 流动相 分离依据 分配层析 纸层析 薄层层析 液体 液体 溶解度 离子交换层析 离子交换柱层析 固体 液体 带电性 静电引力 吸附层析 吸附薄层层析 气体吸附层析 固体 固体 液体 气体 吸附力 亲合层析 酶与底物 抗原与抗体 固体 液体 配体专一性 凝胶层析 凝胶过滤 固体 液体 分子大小

分配层析」分配系数:溶质在互不相溶的两相中溶解度不同,在终点时达到一种平衡,其比值为一个常数,即分配系数(α)。固定相内溶质的浓度α=流动相内溶质的浓度是一种连续抽提法。一种溶剂通常是被结合在固定的惰性支持物(柱、膜、纸)上的水,另外一相由流动的被水饱和的有机溶剂构成,它流过固定相。如果某一混全物的各组分在这两相中的分配系数有足够的差异,它们就可以被分离

分配层析 l 分配系数:溶质在互不相溶的两相中溶解度不同, 在终点时达到一种平衡,其比值为一个常数,即分 配系数(α)。 ￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾固定相内溶质的浓度 ￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾￾流动相内溶质的浓度 l 是一种连续抽提法。一种溶剂通常是被结合在固定 的惰性支持物(柱、膜、纸)上的水,另外一相由 流动的被水饱和的有机溶剂构成,它流过固定相。 l 如果某一混全物的各组分在这两相中的分配系数有 足够的差异,它们就可以被分离。 α =

纸层析纸层析是最简单的液一液相分配层析纸层析以滤纸为惰性支持物,滤纸纤维上的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定相,有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时,与固定相之间连续抽提,使物质在两相间不断分配而得到分离

纸层析 l 纸层析是最简单的液一液相分配层析。 l 纸层析以滤纸为惰性支持物,滤纸纤维上 的羟基具有亲水性,吸附一层水作为固定 相,有机溶剂为流动相。有机相流经固定 相支持物时,与固定相之间连续抽提,使 物质在两相间不断分配而得到分离

Rf值溶质在滤纸上的移动速度即物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用R.值来表示的。在一定的条件下某种物质的R.值是常数。色斑中心到点样点的距离Rf=溶剂前沿到点样点的距离R.值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关

Rf值 溶质在滤纸上的移动速度即物质被分离后在纸层 析图谱上的位置是用Rf值来表示的。在一定的条件 下某种物质的Rf值是常数。 Rf= Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层 析滤纸的质量和层析温度等因素有关。 溶剂前沿到点样点的距离 色斑中心到点样点的距离

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