南京师范大学：《微生物学》课程PPT教学课件（实验指导）实验十一 水的微生物学检查

实验十一水的微生物学检查 何伟06一04

实验十一 水的微生物学检查 何伟 06－04

实验目的 ■了解并掌握细菌总数的测定方法 ■学习检测水中大肠菌群的原理和方法 ■了解大肠菌群数量与水质状况的关系 ■了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性

实验目的 ◼ 了解并掌握细菌总数的测定方法 ◼ 学习检测水中大肠菌群的原理和方法 ◼ 了解大肠菌群数量与水质状况的关系 ◼ 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性

实验原理 ■饮用水是否合乎标准，通常通过水中细 菌总数和大肠菌群数来确定。细菌总数 是指1毫升水样在普通琼脂培养基中， 37℃24小时培养后所生长的菌落数。一 般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过 100个

实验原理 ◼ 饮用水是否合乎标准，通常通过水中细 菌总数和大肠菌群数来确定。细菌总数 是指1毫升水样在普通琼脂培养基中， 37℃24小时培养后所生长的菌落数。一 般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过 100个

如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原 菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流 行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异 与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原 菌，常常有困难。而大肠菌群是肠道好氧菌中 最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪 便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来 判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源 受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000 毫升自来水中大肠菌群不超过三个

◼ 如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原 菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流 行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异 与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原 菌，常常有困难。而大肠菌群是肠道好氧菌中 最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪 便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来 判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源 受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000 毫升自来水中大肠菌群不超过三个

实验材料 ■ 普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3 倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸 钠培养基。 ■ 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、 试管。 ■自来水、池水、河水或湖水

实验材料 ◼ 普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3 倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸 钠培养基。 ◼ 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、 试管。 ◼ 自来水、池水、河水或湖水

实验步骤 细菌总数测定 1)自来水 吸取1ml水样与平皿内冷却至45℃的培养基混匀， 于37℃下培养24h计数，共两皿。同时做不接水 样的空白皿对照试验。 2)池水、河水或湖水 采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取 10-1、10-2、10一3三个稀释度，污秽严重的取 10-2、10-3、10-4三个稀释度。 最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的 细菌测定试验

实验步骤 ◼ 细菌总数测定 1）自来水 吸取1ml水样与平皿内冷却至45℃的培养基混匀， 于37℃下培养24h计数，共两皿。同时做不接水 样的空白皿对照试验。 2） 池水、河水或湖水 采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取 10－1 、10－2 、10－3三个稀释度，污秽严重的取 10－2 、10－3 、10－4三个稀释度。 最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的 细菌测定试验

■ 菌落计数方法 (1)计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 半计数×2 (2)选择平均菌落数在30~300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30~300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 (3)所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 (4)所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 (5)所有菌落数均不在30~300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数

◼ 菌落计数方法 （1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数

表41-13计算菌落总数方法举例 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌 菌落总数 例次 10-3 落数之比 备注 10-1 10-2 (个毫升) 1365 164 20 16400或1.6×104 两位以 2 2760 295 46 1.6 37750或3.8×104 后的数 3 2890 271 60 2.2 27100或2.7×104 字采取 4 无法计数 1650 513 513000或5.1×105 四舍五 5 27 11 5 270或2.7×102 入的方 6 无法计数 305 12 30500或3.1×104 法去掉

大肠菌群检查 一一一滤膜法 过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面 向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器， 将100mL水浴（如水样含菌数较多，可减少过 滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开 滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤

◼ 大肠菌群检查 －－－滤膜法 过滤水样 用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面 向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器， 将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过 滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开 滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤

培养 水样滤完后，再抽气约5$，关上滤器阀门，取 下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放 在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留 细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者 间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃ 恒温箱内培养22~24h

◼ 培养 水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取 下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放 在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留 细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者 间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃ 恒温箱内培养22～24h