南京师范大学：《微生物学》课程PPT教学课件（实验指导）实验六 微生物的接种技术及分离纯化

实验七 实验六微生物的接种技术及分 离纯化

实 验 七 实验六 微生物的接种技术及分 离纯化

土壤微生物的分离和培养 目的要求 ■ 实验原理 ■实验材料 ■实验步骤 实验结果 ■思考题

土壤微生物的分离和培养 ◼ 目的要求 ◼ 实验原理 ◼ 实验材料 ◼ 实验步骤 ◼ 实验结果 ◼ 思考题

目的要求 ■初步掌握微生物的分离、培养和菌种的基 本方法。 量 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术

目的要求 ◼ 初步掌握微生物的分离、培养和菌种的基 本方法。 ◼ 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术

实验原理 土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离

实验原理 ◼ 土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离

表6：H1徽生物四大类盖的分离和培养 样品 分离 分离 培养基 来源 对象 方法 稀释度 名称 培养温度心培养时间/日 土样 细菌 稀释 分离 10-510-10 肉资蛋白陈 30~37 1~2 土样 放线菌 稀释 分离 1010,10- 高氏合成1号 28 57 土样 霉茵 分离 101010 町 28~30 35 面配 (域土祥) 酵母菌 稀释 分离 10-、1010 豆芽汁葡萄糖 2830 23 织菌分 细菌 始线 离平板 单菌落 分离 肉膏蛋白陈 3037 1~2

实验材料 样品：新鲜土壤。 ■ 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 ■无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、 装有9mL无菌水的试管。 ■其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、 电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 试剂：1万U/mL链霉素液、10%苯酚

实验材料 ◼ 样品：新鲜土壤。 ◼ 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏 一号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 ◼ 无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、 装有9mL无菌水的试管。 ◼ 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、 电子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴。 ◼ 试剂：1万U/mL链霉素液、10％苯酚

实验步骤 ■稀释涂板法 稀释混合平板法( 混菌法) ■划线分离 ■微生物的培养

实验步骤 ◼ 稀释涂板法 ◼ 稀释混合平板法（混菌法） ◼ 划线分离 ◼ 微生物的培养

制平板： 每组制培养 皿3付。 a 在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级。 图7一2倒平板 a.皿加法b.手持法

◼制平板： 每组制培养 皿3付。 在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级

实验步骤1（微生物的分离一稀释涂平板法） 制备土壤稀释液：（无菌操作过程见教师示范） 1.称取土壤5g,放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min,即为稀释10-1的土壤悬液。 2.另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10-2、 10-3、10-4、10-5、10-6。取已稀释成10-1的土壤液， 振荡后静止0.5min,用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入 10-2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之 充分混匀，即成10-2土壤稀释液。同法依次连续稀释至 10-4、10-5、10-6土壤稀释液。 ■在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管 >

实验步骤1（微生物的分离—稀释涂平板法） ◼ 制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤5g，放入45mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－1的土壤悬液。 2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔编上10－2 、 10－3 、10－4 、10－5 、10－6。取已稀释成10－1的土壤液， 振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取1mL土壤悬液加入 10－2的无菌水的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之 充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至 10－4 、10－5 、10－6土壤稀释液。 ◼ 在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管

图一1土壤稀释液的 制备和稀释液的取样 依次各1mL 图7一3及管取菌液 10- 收 90m 每管各9mL无蕴水 无水 每皿例 15mL 琼脂塔养基

图－1 土壤稀释液的 制备和稀释液的取样