南京师范大学：《微生物学》课程PPT教学课件（实验指导）实验二 革兰氏染色及细菌特殊结构观察

实验二 革兰氏染色及细菌特 殊结构观察 2006.03.08

实验二 革兰氏染色及细菌特 殊结构观察 2006.03.08

实验目的 ·学习细菌的革兰氏染色原理和方法 了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛

一、实验目的  学习细菌的革兰氏染色原理和方法  了解细菌的特殊形态结构： 芽孢、荚膜、鞭毛

二、 实验原理 ◆单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 渗了 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等

二、实验原理 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等

革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 positive (a)Gram-positive Prolen Peptidoglycan Gtan时 (b)Gram-negative

革兰氏染色 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构

◆G一肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。 G十细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色

 G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。  G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色

细菌的特殊形态结构 ◆芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态

细菌的特殊形态结构 芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各 种极端环境。 荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体 鞭毛：运动，菌落形态

三、实验材料 ◆大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌(24h培养物) 兼革兰氏染色液一套

三、实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌（24h培养物） 革兰氏染色液一套

四、实验步骤 兼革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察 兼观看鞭毛、荚膜的示范片 兼绘图、写实验报告

四、实验步骤 革兰氏染色 枯草杆菌的芽孢观察 观看鞭毛、荚膜的示范片 绘图、写实验报告

革兰氏(Gram) 染色法 1.涂片 2.初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 用结品紫染色 用自来水冲洗 用碘液媒染 3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。 4.脱色：除去残水后，滴加95%酒 用自来水冲洗 用95%酒精脱色 用自来水冲洗 精进行脱色约15一20秒，后立即 用流水冲洗。 5.复染：滴加番红染色液，染3一5 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 用蕃红复染「用自来水冲洗 吸干水分 6.镜检：观察染色结果并绘图。 图2一2革兰氏染色过程

革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸 铵结晶紫染液，染1分钟，倾去 染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲 去残水，而后用其覆盖涂面1分 钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒 精进行脱色约15－20秒，后立即 用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染3－5 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图

枯草杆菌芽孢的观察 Vegetative cell Sporulating cel Mature spore Figure462 Formation of the endospore.Phase contrast pho- tomicrographs are of cells of Clostridium pascui

枯草杆菌芽孢的观察