南京师范大学：《微生物学》课程PPT教学课件（实验指导）实验四 微生物的显微镜直接计数法和大小的测定

实验五 实验四微生物的显 微镜直接计数法和 大小的测定

实 验 五 实验四 微生物的显 微镜直接计数法和 大小的测定

实验目的 ◆学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法

实验目的  学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。  学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法

实验材料 ◆显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸

实验材料  显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸

实验步骤 ◆ 测定酵母菌细胞的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 目镜测微尺 10 20 30 4050 070,80.990 镜台测微尺中央部分 用镜台测微尺校正目镜测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差， 因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正

实验步骤  测定酵母菌细胞的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺 目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差， 因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正

◆目镜测微尺的校正：在40×镜下，看清镜台测 微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜 台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测 微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然 后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计 算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的 格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10um, 所以可得 目尺每格长度m)二（台尺格数×10）)目尺格数 ◆菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取 下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在 40×镜下用月镜测微尺测量菌体的长和宽

 目镜测微尺的校正：在40×镜下，看清镜台测 微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜 台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测 微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然 后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计 算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的 格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm， 所以可得 目尺每格长度(µm)=（台尺格数×10）/目尺格数  菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取 下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在 40×镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽

◆酵母菌显微直接计数 ◆ 方法：活菌计数法 平板菌落计数法；总菌计数 法一血球计数板或霍瑟(Peroff Hausser) 细菌计 数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 0.1mm 动n A.血球计数板正面 计数室(o.1um高) 盖玻片 B.16大格×25小格型计数板 A.血球计数板侧面 A.25大格×16小格型计数板

 酵母菌显微直接计数  方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数 法——血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计 数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已）

1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖血盖片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。 3.用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的 平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上 16(或25)就得出计数区总菌数，最后再换 算到每mL菌液中的含菌数。 5. 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽 计一半

1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖血盖片。 2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。 3. 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格的 平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上 16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换 算到每mL菌液中的含菌数。 5. 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽 计一半

实验结果 ◆目镜测微尺标定结果： 40×镜下倍目镜测微尺每格长度是 μm。 菌号 酵母的直径大小测定结果 目镜测微尺格数 实际直径/m 2 3 4 5 均值

实验结果  目镜测微尺标定结果： 40×镜下 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 菌号 酵母的直径大小测定结果 目镜测微尺格数 实际直径/µm 1 2 3 4 5 均值

◆将显微计数结果记录于下表中。T表示五个 中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数 T D 二室 平均 2 3 4 5 值 第 室

 将显微计数结果记录于下表中。T表示五个 中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数 T D 二室 平均 值 个 /ml 1 2 3 4 5 第一 室 第二 室

问题与讨论 ◆为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？ ◆在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？

问题与讨论  为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？  在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？