山东第一医科大学（山东省医学科学院）：《分析化学》课程授课教案（打印版）第十一章 分子荧光分析法

泰山医学院 省级精品课程申报 教 案 姓名 学年第一学期 时间 节次 课程名称 分析化学Ⅱ 授课专业及层次2010级药学、临床药学 本科 授课内容 第十一章荧光分析法 学时数 教学目的 熟悉荧光分析法的原理，掌握荧光分析法法常用的定量方法，了解荧光光度计结 构和使用方法 而占 荧光产生的机理，荧光分析法法常用的定量方法 难点 多组分的定量分析方法 自学内容 荧光分光光度计的结构 使用教具 多媒体 相关学科知识 物理化学、无机化学 教学法讲授、启发 讲授内容纲要、要求及时间分配（可加附页） 第一章荧光分析法 第一节荧光分析法的基本原理 一、分子荧光(molecular fluorometry) 物质分子接受光子能量被滋发后，从激发态的最低振动能级返回基态时发射出的光。分了 荧光分析法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。 1、分子荧光的产生 (1)分子电子能级与激发过程：物质分子体系中存在着电子能级、振动能级和转动能级 室温时大多数分子处在电子基态的最低振动能级，当受到一定的辐射能的作用时，就会发 生能级之间跃迁。电子能级又分为单重态(S)和三重念(T)。 (2)荧光的产生：分子在室温时基本处于电子基态，当吸收了紫外可见光后，基态分子 中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动转动能级。处于滋发单重态的分子不稳 定，通过铝射跃迁或无辐射跃迁方式释放多余能量返回基态。在辐射跃迁中就会产生分子 荧光。 2、分子荧光基本概念 (1)振动地豫：激发态各表动能级的分子通过与溶剂分子的碰撞而将部分振动能量传递绘 溶剂分子，其电子则返回到同一电子的最低振动能级过程。 (2)内部能量转换：当两个电子激发态之间的能量相差较小以全其振动能级有重叠时，受 微分子山高电子能级以无辐射方式转移金低电子能级过程 (3)外部能量转换：在溶液中激发态分子与溶剂分子及其他溶质分子之间相互碰撞而以热 能形式放出能量过程

@泰山医学院 省级精品课程申报 讲授内容纲要，要求及时间分配（可加附页） (4)体系间跨越：处于激发态分子的电子发生自旋反转而使分子的多玉性发生变化，分子 山激发单重态黔越到激发二重态过程。 (5)磷光：经过体系间黔越的分子再通过振动地豫降全激发三币念的最低振动能级，分子 在此二重态的最低振动能级存活一段时间后返回全基念的各个振动能级而发出的光辐射 (6)激发光谱：荧光强度（下）对激发波长的关系曲线，它表示不同激发波长的辐射引起 物质发射某一波长荧光的相对效率。 (7)发射光谱：荧光强度（下）对发射波长的关系曲线，它表示激发光的波长和强度保持 不变时，在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。 3、激发光谱与发射光谱关系 荧光发射波长总是大于激发光波长：荧光光谱形状与激发波长无关：荧光光谱与激发光 谱成镜像关系 二、荧光与分子结构 1、荧光寿命和荧光效率：ī：和小：表示。2、有机化合物分子结构与荧光关系：(1)长共 轭结构。(2)分子性。(3)取代基。 三、荧光试剂（自学内容） 四、影响荧光强度外部因素（自学内容） 第二节荧光定量分析法 、荧光强度与物质浓度关系：F=2.3KEC=KC 二、定量分析法 1、校正曲线法（同紫外-可见分光光度法相似）。2、比较法：C(代x-FF-F)C 3、联立方程法：应用于多组分分析。 第二节荧光分光光度计 第一 路豆站

⑧ 泰山医学院 Taishan Medical University 省级精品课程申报 讲授内容纲要、要求及时间分配（可加附页） 1、光源氙弧灯：250-800m连续光谱：高压求灯：线光谱（最好） 2、 分光系统（双单色器）：第一单色器作用：选择激发波长：第二单色器作用：分离出荧 光发射波长 3、样品池：石英材料做成的四面透光比色皿，1cm 4、检测器：光电倍增管 第四节应用实例 1、分子荧光法测定奎宁含量 2、荧光法测定利血平含量 作业：P229:4、6、7(注意讲评解题要点)