山东第一医科大学（山东省医学科学院）：《分析化学》课程授课教案（打印版）第十八章 高效液相色谱法

泰山医学院 省级精品课程申报 教 案 姓名 学年第二学期 时 节次 课程名称 分析化学Π 授课专业及层次 2010级药学、临药本科 授课内容 第十八章HPLC分析法 学时氮 3 教学日的 熟悉HPLC基本流程，掌握定性定量方法，了解分原E 所点 HPLC的定性定量方法 难占 分离原理 自学内容 色谱仪使用方法 使用教具 多媒体 相关学科知识物理化学、无机化学、化工原理 教学法讲授、练习 讲授内容纲要、要求及时间分配（可加附项） 第八章高效液相色谱法 以液体为流动相的色消法称为液相色谱法。高效液相色谱法是在经典液相色谱法的基础上 引入了气相色蒂法的理论和实验技术，以高压输送流动相，采用高效固定相及高灵敏度检 测器，发展而成的现代液相色谱分析方法。其特点是：适用范田广：分离性能好：分析速 度快：流动相可选样性范围宽：灵敏度高：色杜可反复使用：流出组分容易收集：安全 第一节高效液相色法的主要类型和原理 一、液周吸附色谱法(LSC)流动相为液体，周定相为周体吸附剂。 1、分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异 2、周定相：与C比，周定相粒径不同(流动相极性NLC),极性小的组分先 出柱，极性大的组分后出柱。适于分离极性组分。4、反相色谱—固定液极性〈流动相 极性(C)。极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱，适于分离非极性组分 、化学键合相色谱法(BPC) 利用化学反应将周定液的官能团键合在载体表面，而构成化学键合相。以化学键合相为园 定相的色谱法称为化学键合相色谱法。化学键合相色谱法是应用最广的色谱法

@泰山医学院 n Medical Universit 省级精品课程申报 讲授内容纲要、要求及时间分配（可加附页） 1,反相键合相色谱法 反相键合相色语法是用非极性固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相常用「八烷 基桂坑键合相(0DS或C),流动相常用甲醇-水火乙腑-水。即流动相的极性大于固定相的 极性。反相色谱法主要用于分离非极性企中极性的各类分子型化合物， 2、正相键合相色语法 正相键合相色漂法是用极性固定相和非极性流动相组成的色谱体系。氰基与氨基是正相 键和色谱法常用的固定相，流动相常用正己杭加适量极性调整剂构成。正相色谱法主要用 于分离极性全强极性的各类分子型化合物。 第二节固定相和流动相的选择 一、固定相固定相是高效液相色谱法的关键组成部分，它直接关系的柱效与分离度。 1、液固色谱固定棉：具有吸附活性的吸附剂。如硅胶、氧化出和高分子多孔微求、分子筛 2、化学箍合相固定相：Si-0-C或si-0-Si-C 二、流动相 1、流动相的基本要求：不与固定相发生化学反应：对试样有适宜溶解度：必须与检测器相 适应：纯度高、粘度小。使用前用微孔滤膜过滤，还要脱气。2、流动相选择性三角形方法 (自学内容)3、洗脱方式：等度洗脱、梯度洗脱。 第二节高效液相色游仪 输液系统：高压输液和梯度洗脱装置。二、分离和进样系统：进样器和色谱柱。 三、检测系统：紫外检测器、荧光检测器、安培检测器、蒸发光散射检测器。四、数据记 录和处理系统。 第四节定性和定量方法 、定性方法：色谱法、化学鉴定法，色谱-光谱联用法(HPLC-MS,HPLC-R) 二、定量方法 1,外标法：以试样的对照品作对照物质，对比求算试样含量的方法。外标法可分为工作曲 线法和外标一点法。A心cn=么×C A 2、内标法：在样品中再加入一种纯物质作内标物，根据内标物与待测组分的定量校正因子。 内标物与样品的质量，求出样品中待测组分的合量。内标法分为工作曲线法、内标一点法 新用公式同气相色谱法