《实验诊断学》课程教学资源（文献资料）血沉检测的标准化

血沉检测的标准化 血沉检测的标准化 上海市临床检验中心金大鸣李泳 前言 血沉检测已有八十多年历史。最初为瑞典医生F?hracus在1918年发明，其后于1920年 Westergren也提出了他的方法，并于1926年规范了血沉管，加了管壁刻度，建立了规范操作，成为流传 于世最广的方法。上世纪三十年代、四十年代先后出现了一些改良法如Wintrobe-Landisberg法(1935 年)改用120mm长的测定管，内径2.5mm,可与红细胞比容通用血样：至1940年又出现了Cutler法， 也是短管，全长为70mm，内径定为5.0mm,其他还有一些大同小异的方法。国内上述方法均有前辈使 用，解放后又采用过前苏联的微量法。近二十多年来，经卫生部医政司、卫生部临床检验中心及中华检验 学会等的推荐，Westergre©n法（魏氏法）已成为国内的规范方法。最近十余年米由于对生物安全问题的 日益重视，易于生物污染的手工操作已开始向半自动化或全自动化方向发展，其操作另由生产厂商规定， 结果参差不一，目前既有进口产品，也有国产产品，为了有所比对，有所溯源，血沉检测的标准化也成为 紧迫的任务之一。 国际血液学标准化委员会(ICSH)、美国NCCLS,以及WHO均组织专家对血沉的标准化作过 多次探讨，先后分别发表过多个文件，其中影响最大的为ICSH的推荐法(1993)，及NCCS的 代号为H24血沉参考法和选择法认可标准。他们均以魏氏法基础，探讨了从采样至报告结果的各个 细节，为血沉检测的标准化作出了重大贡献。 ICSH和NCCLS标准化等级分类 ICSH和NCCLS均采用标准化等级分类，内容基本相似，由于NCCLS的文件较新，主要参照后者。 血沉检测虽历史甚久，但检测原理还不够清楚，影响不准确度、不精密度的各种因素也还未完全掌握 和控制，因此迄今仍未建立确定性方法。血沉检测目前最高等级为参考法，其次为标淮化方法，（相当于 二级参考法)，再次为选择法即工作法或常规法。由于血沉的半自动和全自动化检测研发起步较晚，血沉 的校正品、控制品的研发尚难满足临床检验需求，也是血沉标准化的难题之一。 参考法：血沉管为全长300±1.5mm两端通的规范200mm刻度魏氏管（玻璃制），管内径2.55mm 或更大些，管内均匀误差小于5%，横轴与竖轴差不大于0.1mm,外径5.5±0.5mm,管壁刻度 200mm误差±0.35mm，1mm间距误差为<0.2mm。所检测血样为EDTA抗凝未稀释样品，其红 细胞比容(PCV)为0.35或更低(0.33-0.35)

血沉检测的标准化 血沉检测的标准化 上海市临床检验中心 金大鸣 李泳 前言 血沉检测已有八十多年历史。最初为瑞典医生 F ? hraeus 在 1918 年发明，其后于 1920 年 Westergren 也提出了他的方法，并于 1926 年规范了血沉管，加了管壁刻度，建立了规范操作，成为流传 于 世 最广的方法。上世纪三十年代、四十年代先后出现了一些改良法如 Wintrobe-Landisberg 法（ 1935 年）改用 120mm 长的测定管，内径 2.5mm ，可与红细胞比容通用血样；至 1940 年又出现了 Cutler 法， 也是短管，全长为 70mm ，内径定为 5.0mm ，其他还有一些大同小异的方法。国内上述方法均有前辈使 用，解放后又采用过前苏联的微量法。近二十多年来，经卫生部医政司、卫生部临床检验中心及中华检验 学会等的推荐， Westergren 法（魏氏法）已成为国内的规范方法。最近十余年来由于对生物安全问题的 日益重视，易于生物污染的手工操作已开始向半自动化或全自动化方向发展，其操作另由生产厂商规定， 结果参差不一，目前既有进口产品，也有国产产品，为了有所比对，有所溯源，血沉检测的标准化也成为 紧迫的任务之一。 国际血液学标准化委员会（ ICSH ）、美国 NCCLS ，以及 WHO 均组织专家对血沉的标准化作过 多次探讨，先后分别发表过多 个 文件，其中影响最大的为 ICSH 的推荐法（ 1993 ），及 NCCLS 的 代号为 H 2A 4 血沉参考法和选择法认可标准。他们均以魏氏法基础，探讨了从采样 至报告 结果的各个 细节，为血沉检测的标准化作出了重大贡献。 ICSH 和 NCCLS 标准化等级分类 ICSH 和 NCCLS 均采用标准化等级分类，内容基本相似，由于 NCCLS 的文件较新，主要参照后者。 血沉检测虽历史甚久，但检测原理还不够清楚，影响 不 准确度、 不 精密度的各种因素也还未完全掌握 和控制，因此迄今仍未建立确定性方法。血沉检测目前最高等级为参考法，其次为标准化方法，（相当于 二级参考法），再次为选择法即工作法或常规法。由于血沉的半自动和全自动化检测研发起步较晚，血沉 的校正品、控制品的研发尚难满足临床检验需求，也是血沉标准化的难题之一。 参考法 ：血沉管为全长 300 ± 1.5mm 两端通的规范 200mm 刻度魏氏管（玻璃制），管内径 2.55mm 或更大些，管内均匀误差小于 5 ％，横轴与 竖轴差不 大于 0.1mm ，外径 5.5 ± 0.5mm ，管壁刻度 200mm 误差 ± 0.35mm ， 1mm 间距误差为 < 0.2mm 。所检测血样为 EDTA 抗凝未 稀释样品，其红 细胞比容（ PCV ）为 0.35 或更低（ 0.33-0.35 ）

标准化方法：血沉管为有200mm刻度两端通玻璃制或塑料制魏氏型血沉管，内径至少2.55mm 所测血样为EDTA抗凝未稀释样品，其PCV为0.35或更低。 选择法：又称工作法或常规法，具有减少生物危害功能，魏氏管可用一次性玻璃或塑料制品，或其 他认可的容器替代。这类器材厂商和用户要保证检验结果能与标准化方法相比对。 上述三个等级的方法中有几点较为重要，参考法和标准化均要求EDTA抗凝，且要求血样PCV为 0.30-0.35,不加调整处理，要求这样的样品相当困难，必要时可以按公式加些自身血浆，或减少些红细胞， 即将ml血液均分为2管，取1管离心沉降，分离血浆并测PCV,代入下列公式： 3.5(PCV0.35)-3.5=需要加入的血浆量 将血浆加入另1未离心的3.5ml血液中，混匀后再核对PCV是否已≤0.35。PCV小于0.35 (1CSH为<0.36)才会有较好的重复性，与此有关的另一条件为血沉管内径必须2.55mm或更大些， 小于2.55mm内径也会使重复性不良，1CSH曾定2.55±0.15mm,2.55+0.15=27mm不影响重 复性：2.55-0.15=2.4mm,则使重复性降低，故以≥2.55mm为妥。 由于参考法与标准化方法要求EDTA抗凝，且不稀释，则与常规操作又有矛盾，一般EDTA抗凝血 液经稀释(4：1)后，血沉均会减慢，血沉值诚小，因此参考法或标准化方法的血沉值还要经过一次 换算，公式为 (未稀释血样ESR×0.86)一12=校正ESR 例：参考法血沉为50mm则代入公式换算为3引mm 1CSH己作出参考法或标准化方法与常规法结果的对照表，本例参考法50mm,常规法查表为2】 41mm。参考法结果经换算稀释法校正值为3引mm,处于21-41mm之间，1CSH的对照表从15mm -105mm是一份重要的数据资料，引用若干以示运用，凡认可的常规法所检测结果95%可以与表中范围 符合，此表既用于方法学评价，也可用于日常质控。 ESR标准化常规法 (未稀释)（4：1稀释) 153-13 205-17 3010-24 4015-32 5021-41 6028-51

标准化方法 ：血沉管为有 200mm 刻度两端通玻璃制或塑料制魏氏型血沉管，内径至少 2.55mm ， 所测血样为 EDTA 抗凝未 稀释样品，其 PCV 为 0.35 或更低。 选择法 ：又称工作法或常规法，具有减少生物危害功能，魏氏管可用一次性玻璃或塑料制品，或其 他认可的容器替代。这类器材厂商和用户要保证检验结果能与标准化方法相比对。 上述三个等级的方法中有几点较为重要，参考法和标准化均要求 EDTA 抗凝，且要求血样 PCV 为 0.30-0.35 ，不加调整处理，要求这样的样品相当困难，必要时可以按公式加些自身血浆，或减少些红细胞， 即将 7ml 血液均分为 2 管，取 1 管离心沉降，分离 血浆并测 PCV ，代入下列公式： 3.5 （ PCV/0.35 ）－ 3.5 ＝需要加入的血浆量 将血浆加入另 1 未离心的 3.5ml 血液中，混匀后再核对 PCV 是否已 ≤ 0.35 。 PCV 小于 0.35 （ ICSH 为 <0.36 ）才会有较好的重复性，与此有关的另一条件为血沉管内径必须 2.55mm 或更大些， 小于 2.55mm 内径也会使重复性不良， ICSH 曾定 2.55 ± 0.15mm ， 2.55 ＋ 0.15 ＝ 2.7mm 不影响重 复性； 2.55-0.15 ＝ 2.4mm ，则使重复性降低，故以 ≥ 2.55mm 为妥。 由于参考法与标准化方法要求 EDTA 抗凝，且不稀释，则与常规操作又有矛盾，一般 EDTA 抗凝血 液经稀释（ 4 ： 1 ）后，血沉均会减慢，血沉值减小，因此参考法或标准化方法的血沉值还要经过一次 换算，公式为 （未稀释血样 ESR × 0.86 ）－ 12 ＝校正 ESR 例：参考法血沉为 50mm 则代入公式换算为 31mm ICSH 已 作出 参考法或标准化方法与常规 法结果 的对照表，本例参考法 50mm ，常规法查表为 21 -41mm 。参考 法结果 经换算稀释法校正值为 31mm ，处于 21 -41mm 之间， ICSH 的对照表从 15mm -105mm 是一份重要的数据资料，引用若干以示运用，凡认可的常规法所检测结果 95 ％可以与表中范围 符合，此表既用于方法学评价，也可用于日常质控。 ESR 标准化 常规法 （未稀释） （ 4 ： 1 稀释） 15 3-13 20 5-17 30 10-24 40 15-32 50 21-41 60 28-51

7035-62 8044-73 9053-85 10062-98 血沉的抗凝剂问题 参考法或标准化方法为何以EDTA抗凝，这是一个与血液常规检查相联系的发现，自从血球仪普及 以来，抗凝剂选择了EDTA,美国大多用K3EDTA,欧洲，我国则多用K2EDTA,早在六十年代 Dawson(1960)报道以EDTA抗凝血4份加1份38gL枸橼酸钠溶液作血沉检测，结果与经典魏 氏法一致，其后于1965年Gambir0又以K3EDTA抗凝血按4：1加入生理盐水作血沉，也取得与 魏氏法一致的结果，经过多年的实践，终于1993年1CSH的文件中推荐为参考法样品，2000年 NCCLS也同样推荐EDTA为参考抗凝剂。采用EDTA抗凝剂首先省却了血沉专用的采血，简化了工作。 其次EDTA抗凝剂4℃贮存延长了稳定期达12h,不影响血沉检测。需要补充说明的是EDTA抗凝 血无论加枸橼酸钠溶液或生理盐水稀释，都应在临检测之前加入混匀，不可过早加入。Gambino当时作 了稀释与不稀释的比较，发现不稀释血样重复性不良，稀释的与魏氏法相关良好，结果一致 EDTA盐种类颜多，NCCLS H2A4将K3EDTA?2H20(1.6-2.4mgml),K2EDTA (1.42.0mgml),Na2EDTA?2H20(1.4-2.0mg/ml)列入可用抗凝剂，由于K3EDTA抗凝剂 可使血液PCV较K2EDTA抗凝血减小约2%，故ICSH用K2EDTA主张PCV≤Q36,美国多用 K3EDTA主张PCV≤0.35为参考血样。 在实施EDTA抗凝之前，枸橼酸钠溶液的浓度也曾一度有过困惑，有的用3.8%，有的用3.2%： 有的用109 nmol/L,有的用106mmol/L,还有其他浓度，现在1CSH和NCCLS均主张用109mmcl/L 符合魏氏当时的3.8%。当上世纪二十年代枸橼酸钠的结品水含量较多分子式为2Na3C6H507?11H 20,而现代化工产品分子式为Na3C6H507?2H20,故当时的3.8%与今日的3.2%的实际 mmol/L含量并未减少，但也不必拒用38gL的抗凝管，因为据1S06710(1995-08-01)文件规定枸 橙酸钠抗凝使用浓度范围为100-136mmol/L,因此38gL尚在允许范围之内，最高限量为40gL。枸 橼酸钠国外介绍以纯水配制，以0.22μm滤膜过滤，盛于灭菌瓶中，4℃贮存可达数月之久，但如见 混浊或见霉菌生长则不可再用。 血沉架的标准化要求 此外血沉架也有标准化要求，应放置平稳，不摇动，不振动，无穿堂风，避直射阳光，血沉管直立（倾 斜小于1·)，室温1825℃，在测定期内温度不可上下波动，稳定在±1℃之内，检测时间定为

70 35-62 80 44-73 90 53-85 100 62-98 血沉的抗凝剂问题 参考法或标准化方法为何以 EDTA 抗凝，这是一个与血液常规检查相联系的发现，自从血球仪普及 以来，抗凝剂选择了 EDTA ，美国大多用 K 3- EDTA ，欧洲，我国则多用 K 2 EDTA ，早在六十年代 Dawson （ 1960 ）报道以 EDTA 抗凝血 4 份加 1 份 38g /L 枸橼酸钠溶液作血沉检测，结果与经典魏 氏法一致，其后于 1965 年 Gambino 又以 K 3 EDTA 抗凝血按 4 ： 1 加入生理盐水作血沉，也取得与 魏氏 法一致 的结果，经过多年的实践，终于 1993 年 ICSH 的文件中推荐为参考法样品， 2000 年 NCCLS 也同样推荐 EDTA 为参考抗凝剂。采用 EDTA 抗凝剂首先省却了血沉专用的采血，简化了工作。 其次 EDTA 抗凝剂 4 ℃ 贮存延长了稳定期达 12h ，不影响血沉检测。需要补充说明的是 EDTA 抗凝 血无论加枸橼酸钠溶液或生理盐水稀释，都应在临检测之前加入混匀，不可过早加入。 Gambino 当时作 了稀释与不稀释的比较，发现不稀释血样重复性不良，稀释的与魏氏法相关良好，结果一致。 EDTA 盐种类颇多， NCCLS H 2 A 4 将 K 3 EDTA ? 2H 2 O （ 1.6-2.4mg/ml ）， K 2 EDTA （ 1.4-2.0mg/ml ）， Na 2 EDTA ? 2H 2 O （ 1.4-2.0mg/ml ）列入可用抗凝剂，由于 K 3 EDTA 抗凝剂 可使血液 PCV 较 K 2 EDTA 抗凝血减小约 2 ％，故 ICSH 用 K 2 EDTA 主张 PCV ≤ 0.36 ，美国多用 K 3 EDTA 主张 PCV ≤ 0.35 为参考血样。 在实施 EDTA 抗凝之前，枸橼酸钠溶液的浓度也曾一度有过困惑，有的用 3.8 ％，有的用 3.2 ％； 有的用 109mmol/L ，有的用 106mmol/L ，还有其他浓度，现在 ICSH 和 NCCLS 均主张用 109mmol/L 符合魏氏当时的 3.8 ％。当上世纪二十年代枸橼酸钠的结晶水含量较多分子式为 2Na 3 C 6 H 5 O 7 ? 11 H 2 O ，而现代化工产品分子式为 Na 3 C 6 H 5 O 7 ? 2 H 2 O ，故当时的 3.8 ％与今日的 3.2 ％的实际 mmol/L 含量并未减少，但也不必拒用 38g /L 的抗凝管，因为据 ISO6710 （ 1995-08-01 ）文件规定枸 橼酸钠抗凝使用浓度范围为 100-136mmol/L ，因此 38g /L 尚在允许范围之内，最高限量为 40g /L 。枸 橼酸 钠国外 介绍以纯水配制，以 0.22 μ m 滤膜过滤，盛于灭菌瓶中， 4 ℃ 贮存可达数月之久，但如见 混浊或见霉菌生长则不可再用。 血沉架的标准化要求 此外血沉架也有标准化要求，应放置平稳，不摇动，不振动，无穿堂风，避直射阳光，血沉管直立（倾 斜小于 1 ° ），室温 18 -25 ℃ ，在测定期内温度不可上下波动，稳定在 ± 1 ℃ 之内，检测时间定为

60min,可上下1min。 标准化玻璃血沉管价格昂贵，使用后以清水丙酮清洗，污水灭菌后排放处理。 怎样以参考法或标准化方法评价常规方法或新开发方法 参考法血样按参考法采取EDTA抗凝，常规魏氏法如以EDTA抗凝，检测时以枸樽酸钠溶液或生理 盐水(4：1)稀释，亦可按厂商说明书规定采样，样品血沉值须布及15-105mm范围，分为4个 区段，各区段例数相近或相等，样品PCV大于0.35者应予调整，等于0.35或小于0.35者不要处理， 样品置室温18-25℃，采样后4h内检测，手工混匀标准管(10-12mm×75mm)至少颠倒混匀12次， 如已静置30-60m者至少混匀16次，试管小于上述规格者应增加混匀次数。精密度以重复性评价，样 品取自每一4分位区，如可能各作10次检测，参考法亦同样操作。 常规法应与参考法平行检测，样品至少100份，选自多种疾病，血沉结果要求均匀分布于15 105mm范围：如有样品血浆与红细胞分界不清，则此例与配对的另一样品值一并删除。 参考法与常规法结果比较，应根据对照表判断，常规结果95%在允许范围内者为评价认可。 如作配对统计分析，则将差值均数，差值SD及t值，显著性(P)等一并报告，并作Band-Aman 一致性图。 怎样以参考法用于质控 选择适当血样1份，1分为2,1份EDTA抗凝血不稀释按参考法要求(PCV<0.35)检测， 另1份按常规操作，稀释后检测，二者结果在参考值常规对照表范用内相互符合，则为在控，否则为失 控。 报告标准化 最后要求报告标准化，血沉由来己久，其实以血沉“率”表示不妥，但己成习惯可以继续使用，血沉× mm/Ih,不如血沉h×mm。请大家审议，谢谢！

60min ，可上下 1min 。 标准化玻璃血沉管价格昂贵，使用后以清水丙酮清洗，污水灭菌后排放处理。 怎样以参考法或标准化方法评价常规方法或新开发方法 参考法血样按参考法采取 EDTA 抗凝，常规魏氏法如以 EDTA 抗凝，检测时以枸橼酸钠溶液或生理 盐水（ 4 ： 1 ）稀释，亦可按厂商说明书规定采样，样品血沉 值须布 及 15 -105mm 范围，分为 4 个 区段，各区段例数相近或相等，样品 PCV 大于 0.35 者应予调整，等于 0.35 或小于 0.35 者不要处理， 样品置室温 18 -25 ℃ ，采样后 4h 内检测，手工混匀标准管（ 10 -12mm × 75mm ）至少颠倒混匀 12 次， 如已静置 30-60min 者至少混匀 16 次，试管小于上述规格者应增加混匀次数。精密度以重复性评价，样 品取自每一 4 分位区，如可能各作 10 次检测，参考法亦同样操作。 常规法应与参考法平行检测，样品至少 100 份，选 自多种 疾病，血沉结果要求均匀分布于 15 -105mm 范围；如有样品血浆与红细胞分界不清，则此例与配对的另一样品值一并删除。 参考法与常规 法结果 比较，应根据对照表判断，常规结果 95 ％在允许范围内者为评价认可。 如作配对统计分析，则将差值均数，差值 SD 及 t 值，显著性（ P ）等一并报告，并作 Bland-Altman 一致性图。 怎样以参考法用于质控 选择适当血样 1 份， 1 分为 2 ， 1 份 EDTA 抗凝血不 稀释按 参考法要求（ PCV<0.35 ）检测， 另 1 份按常规操作，稀释后检测，二者结果在参考值常规对照表范围内相互符合，则为在控，否则为失 控。 报告标准化 最后要求报告标准化，血沉由来已久，其实以血沉“率”表示不妥，但已成习惯可以继续使用，血沉×× mm/1h ，不如血沉 1h ×× mm 。请大家审议，谢谢！