电子科技大学：《生物物理 Biophysics》课程教学资源（课件讲稿）蛋白质（造血水稻纯化、一级二级结构解析）

上节课知识点回顾--PNAS造血水稻 分子量 D300 三级结构 A Time (min) 0102630405060700t0110120 02 04 转基因水稻 06 结合能力 3403603400420 440 Wavelength (nm) 高级结构 治疗肝腹水能力 二级结构 腹 B “三氨基酸序列- 级结构 围降低 40 200 210220230 240 25 Wavelength(nm) 0.250k 050kg 1.0g/kp

上节课知识点回顾 --- PNAS造血水稻 转基因水稻 氨基酸序列--- 一级结构 二级结构 三级结构 高级结构 结合能力 治疗肝腹水能力 分子量 严禁复制

课堂讨论 5出出9出出“出出5“9共型9日959号型型日型型想号型999日8日999型9日9594出生 讨论-1分离、纯化过程 emmaccacm-m-m-.--cm... 讨论2蛋白质一级结构测定 讨论3蛋白质二级结构检测 讨论4蛋白质三级结构检测 讨论5蛋白质高级结构解析简介

课堂讨论 讨论-1 分离、纯化过程 讨论-2 蛋白质一级结构测定 讨论-3 蛋白质二级结构检测 讨论-4 蛋白质三级结构检测 讨论-5 蛋白质高级结构解析简介 严禁复制

讨论1分离、纯化过程 A 个 IEC-(cation) Disalting Concentration 调节pH Extraction IEC-(anion) Lyophilization 至5.0 → Clarification HIC Product 2 3 Processing time(day) B 70K 55K0 43K0 Lot1013102010221025102710311110pMsA

讨论-1 分离、纯化过程 调节pH 至5.0 严禁复制

疑问-1是否HSA等电点pI=5? 水化膜 水化膜 碱 碱 酸性条件 碱性条件 带正电 酸 酸 带负电 带正电荷蛋白质日 等点电时的蛋白质 :带负电荷蛋白质日 (亲水胶体) (亲水胶体) (亲水胶体) aaa卡as-aa COO 8900.500。学 脱水 蛋白质表观不带 脱水 电，易聚集沉淀 阴离了 阳离子 不稳定蛋白颗粒 带正电荷蛋白质 带负电荷蛋白质 (疏水胶体) (疏水胶体) 蛋白质聚集沉淀 @闻性书店

疑问-1 是否HSA等电点pI = 5？ 蛋白质表观不带 电，易聚集沉淀 酸性条件 带正电 碱性条件 带负电 NH3 + COO- 严禁复制

疑问-2纯化是否会利用这个性质呢？ A Grinding IEC-(cation) 阳离子交换柱 Extraction IEc(anion)← 阴离子交换柱 Clarification HIC Product ↓ 1 2 Processing time(day) B 70(0 43K0 LoM10131020t0221025102710011110pMsA

疑问-2 纯化是否会利用这个性质呢？ 阳离子交换柱 阴离子交换柱 严禁复制

混淆-- 搞清使用这两类柱子目的？ 洗脱buffer pH=7.5 直接流出？ pH>pI 阴离子交换柱 水化膜 酸 修点染鞍HSA带负点鹬 亚禁复制 被纯化！ 除杂蛋 阳离子交换柱 白？

混淆 --- 搞清使用这两类柱子目的？ 阳离子交换柱 pH > pI 洗脱buffer pH = 7.5 HSA带负点 直接流出？ 被纯化！ 除杂蛋 白？ 阴离子交换柱 严禁复制

疑问3纯化还利用了哪些手段？ A Grinding IEC-(cation) Disalting Concentration ↓ Extraction IEC-(anion) Lyophilization Clarification HIC 疏水色谱柱 ↓ 1 2 3 Processing time(day) B 70(0 43K0 34KD LoM10131020t0221025102710011110pMsA

疑问-3 纯化还利用了哪些手段？ 疏水色谱柱 严禁复制

疑惑为什么HSA可以用疏水色谱柱HⅡC纯化？ 疏水基团 有序水分子 蛋白质表面疏水区域 表面暴露的疏水区域 亲水区域 IN 亚木农 bufferp高 盐 疏水色谱分离原理

疑惑 为什么HSA可以用疏水色谱柱HIC纯化？ 疏水色谱分离原理 蛋白质表面疏水区域 buffer高 盐 疏水基团 有序水分子 表面暴露的疏水区域 亲水区域 严禁复制

疑问-4高盐洗脱如何除盐？ A Grinding IEC-(cation) Disalting 凝胶过滤柱 Concentration (Size) Extraction IEC-(anion) Lyophilization Clarification HIC Product 2 Processing time(day) B C 8 L01013102010221025102710311110sA

疑问-4 高盐洗脱如何除盐？ 凝胶过滤柱 (Size) 严禁复制

疑问-5如何浓缩？ A Grinding IEC-(cation) Disalting Concentration 超滤 (size) Extraction IEC-(anion) Lyophilization Clarification HIC Product 2 Processing time(day) B C L01013102010221025102710311110sA

疑问-5 如何浓缩？ 超滤（size） 严禁复制