电子科技大学：《生物物理 Biophysics》课程教学资源（课件讲稿）吸收误差、荧光简介

上节课知识回顾 7 LED灯 660nm Hb/HbO,吸收 透过光光强减弱 A=εbc 计算血氧饱和度

上节课知识回顾 Hb/HbO2吸收 LED灯 660 nm 透过光光强减弱 A= bc 计算血氧饱和度 严禁复制

实际检测需求-不同体系，入射波长不同 部 antpedia 紫外-可见分光光度计 758569-Peg D0-egup.s0阳2

实际检测需求 --- 不同体系，入射波长不同 紫外-可见分光光度计 严禁复制

光源 180-900nm 透过光l1 入射光。 检测器 样品池 电脑 A绿=1g(lo/八1）

180-900 nm 检测器 电脑 样品池 入射光I 透过光 0 I1 光源 A绿 = lg（I0 /I1） 严禁复制

光源 180-900nm 透过光11 入射光lo 检测器 样品池 电脑 A黄=1g(1八1)

180-900 nm 检测器 电脑 样品池 入射光I 透过光I 0 1 光源 A黄= lg（I0 /I1） 严禁复制

光源 180-900nm 紫外可见 分光 透过光1 入射光l。 检测器 样品池 吸收光程度 电脑 A红=lg(l/I1)

180-900 nm 检测器 电脑 样品池 入射光I 透过光I 0 1 光源 A红= lg（I0 /I1） 紫外-可见 分光 吸收光程度 严禁复制

紫外-可见吸收光谱 'n'e /ooueqlosqV 吸光度值 基线 最大吸收峰位音 Wavelength/nm

Wavelength/ nm A b s o r b a n c e / a . u . 最大吸收峰位置 吸光度值 基线 紫外-可见吸收光谱 严禁复制

应用1定性分析--最大吸收峰位置 nature( COMMUNICATIONS ARTICLE Received 27 Dec 2015 Accepted 29n 2016 Published 19Aug2016 b0l:10580/OPEN Bright monomeric near-infrared fluorescent 最大吸收峰位置 bacterial phytochromes with the demonstrated in vivo applications. proteins as tags and biosensors for multiscale NIR FP Ex,nm Em,nm Extinction Quantum Molecular Oligomeric Photostability pKa Brightness in Ref. imaging coefficient, yield,% brightness state in mammalian HeLa cells versus cells,tva,s versus Daria M.ShcherbakovaMikhail BalobanAander V.Emely Michael Brenwitz iRFP713, 1RFP713,% Peng Gua25 Vladislav V Verihusha2 miRFP67 644 670 71300±2,100 1.6±0.5 134 Monomer 155±6 45 30.0±17 This work miRFP67 642 670 87.400±2.600 14.0±0.6 198 155±5 4.5 72.0±35 miRFP70 674 703 90,900±2.700 8.6±05 127 394±7 45 374±24 miRFP70 683 709 78,400±2.400 5.4±0.2 192±5 4.5 30.1±19 mlFpt 683(683) 5(704) 65.900±2.000 69±0.9 74 Monomer 54±5 4.5 14.5±29 个 (82.000) (8.4) IFP2.0t.t 688(690) 09(711) 72,900±2,200 6.8±0.2 80 Dimer 108±6 4.5 7.9±11 18 GAF (98.000) (8.1) iRFP670 643 670 114,000 122 225 Dimer 290 4.0 79 16 iRFP682 663 90.000 n.1 490 45 105 iRFP702 673 93000 8.2 a 630 4.5 6 iRFP713 690 713 98,000 6.3 100 960 4.5 100 (aka iRF iRFP720 702 720 96.000 6.0 93 490 45 110 16 伊uore red.Error,sd.(n-3) ective NIR orescence in trarsienty transfected live HeLa cells with no supply of eaogenous BVand after normalization to fluorescence of co-transtected EGFP. Only IFP2.0 is presented as the latest version in a seres of the IFP proteins SAlthough IFP20was ongnally reported as a monomer late it was ound to beadmer which was also conmed by its developers PHY

应用-1 定性分析 --- 最大吸收峰位置 最大吸收峰位置 严禁复制

应用-2定量分析 光程长/cm 透过光l1 入射光l0 A=log(II)=kbc←— 浓度 样品池 消光系数

A = log（I0 /I1）= kbc 消光系数 光程长/cm 浓度 应用-2 定量分析 严禁复制

练习-1 个课题组在进行新冠核酸检测，他们提取了病毒RNA，并 260nm 选择1cm比色皿，测得260nm吸光度值A260=0.3,请计算病毒 RNA浓度？ c=0.3/0.025=12ug/mL sample 260 nm Extincuon coemcien dsDNA(双链) 0.020mL.ug1.cm-1 ssDNA(单链) 0.027mL.ug1.cm-1 RNA 0.025mL.ug1.cm-1 寡聚核苷酸 0.033mL.ug1.cm-1

一个课题组在进行新冠核酸检测，他们提取了病毒RNA，并 选择1cm比色皿，测得260 nm吸光度值A260 = 0.3, 请计算病毒 RNA浓度？ dsDNA (双链） ssDNA(单链） RNA 260 nm Extinction coefficient 0.020 mL.ug-1.cm-1 ? 寡聚核苷酸 ? 0.027 mL.ug-1.cm-1 0.025 mL.ug-1.cm-1 0.033 mL.ug-1.cm-1 sample 练习-1 260 nm F e 3 + c = 0.3/0.025 = 12 ug/mL 严禁复制

主观题10分 回 设置 场景-2某同学想要合成TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG序列引物，分子量为6541g/mol, 0D26o=2(光程长1cm)，(1)请问合成公司应该给他合成多少nmol的引物？（体积按1mL 计算)；（2)这些引物在一个1.5mLEP管中，请问加入多少双蒸水才能配成0.1mM水溶液？ 练习-2 sample 260 nm Extinction coefficient dsDNA 0.020mL.ug1.cm-1 ssDNA 0.027mL.ug1.cm-1 RNA 0.025mL.ug1.cm-1 寡聚核苷酸 正常使用主观题需2.0以上垢木甲当 0.033mL.ug1.cm-1 h内太

作答 正常使用主观题需2.0以上版本雨课堂 场景-2 某同学想要合成TGGGCGGCGGTTGGTGTTACG序列引物，分子量为6541 g/mol ， OD260= 2（光程长1cm），（1）请问合成公司应该给他合成多少nmol的引物？（体积按1mL 计算）；（2）这些引物在一个1.5 mLEP管中，请问加入多少双蒸水才能配成0.1 mM水溶液？ dsDNA ssDNA RNA 260 nm Extinction coefficient 0.020 mL.ug-1.cm-1 ? 寡聚核苷酸 ? 0.027 mL.ug-1.cm-1 0.025 mL.ug-1.cm-1 0.033 mL.ug-1.cm-1 sample 练习-2 主观题 10分 严禁复制